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新虫 (小有名气)

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[求助] DNA提取总出现拖尾已有1人参与

DNA提取第一次跑胶总拖尾，损失很多，大家有什么好的提DNA的方法吗？求推荐

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【原创】原创之六：环境样品总DNA的提取与纯化【已搜索无重复】已经有178人回复

1楼 2017-10-09 11:17:58

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晋鹏

版主 (知名作家)

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【答案】应助回帖

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原因有以下：
1、可以考虑是不是样品不纯，目的产物与杂带相差不大，所以要多跑一段时间才有尾巴。参考marker,marker应该不会有。如果有的话说明配胶有问题。
2 、琼脂糖检测DNA一般去1~5微升原液，加2微升溴酚蓝便可，注意上样浓度；
3、可能是原液浓度太大造成的；
4、可能DNA已降解。
5、在提取前对样品进行一定的脱腐处理呀。很简单。有一种TENP buffer，文献中查的到的。
6、 DNA降解避免核酸酶污染。
7、 DNA上样量过多，可以减少凝胶中DNA上样量。
8、所用电泳条件不合适，可以将电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃,巨大DNA链，温度应＜15℃，核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。
9、 DNA样含盐过高，可以在电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。
10、有蛋白污染，可以采用电泳前酚抽提去除蛋白。
11、 DNA变性，电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA