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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 老师您好，请问我做完TA克隆之后需要连接表达载体，转化到DH...
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小小于不吃鱼

新虫 (初入文坛)

[求助] 老师您好，请问我做完TA克隆之后需要连接表达载体，转化到DH...

老师您好，请问我做完TA克隆之后需要连接表达载体，转化到DH5α里。我的菌株是链霉菌，表达载体是质粒PIB139,可是我在克隆后提取的质粒与PIB139进行双酶切后进行连接转化。可是在16h后却没有一个转化子长出。请问老师，是不是我酶切后胶回收的浓度太低了（质粒浓度是20ng/ml左右，表达载体浓度是70ng/ml）还是我x-gal和iptg的浓度太高（终浓度是80ug/ml）。 @biostar2009

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1楼 2017-10-09 09:57:54
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dchqde

新虫 (小有名气)
回收产物浓度算非常低的。其他操作建议也发来看看

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2楼2017-10-09 10:15:06
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小小于不吃鱼

新虫 (初入文坛)
老师这是表达载体连接与转化过程 @biostar2009

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3楼2017-10-09 11:02:12
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yangmeng0711

新虫 (小有名气)
双酶切有可能有的酶没有切好，导致连不上，可以分别单酶切试试，还有你的pIB139从哪来的啊

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4楼2017-10-09 14:24:18
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