24小时热门版块排行榜    

查看: 1262  |  回复: 8

新人求帮助

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr没有条带 已有1人参与

我有两条相同来源的基因序列,其功能也相似,但是其中一条扩增不出来,另一条却可以,模板是一样的基因组。扩增不出来的序列是1400bp左右,引物设计的是同源重组的引物,一条tm值是59.4,一条是62.6,我做梯度pcr从50到62都没有条带

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Mannix Li

新虫 (初入文坛)

既然pcr没有条带,那就要考虑是不是引物问题或者模板问题

发自小木虫Android客户端
2楼2017-10-02 18:08:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Mannix Li

新虫 (初入文坛)

模板有可能被降解了,或者是引物本来就和你基因序列结合不上

发自小木虫Android客户端
3楼2017-10-02 18:09:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

新人求帮助

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Mannix Li at 2017-10-02 18:09:43
模板有可能被降解了,或者是引物本来就和你基因序列结合不上

模板肯定没有问题,因为我另外一条基因能p出来,引物是按照基因序列设计的,应该不会有问题的吧

发自小木虫IOS客户端
4楼2017-10-02 18:31:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

香蕉芒果99

新虫 (小有名气)

多设计几条引物,筛选出可以用的。

发自小木虫Android客户端
5楼2017-10-02 19:05:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-10-02 23:25:30
1、用梯度PCR跑,多加一些模板和上下游引物,文献里的退火温度也许并不适合你们实验室的条件,有时候增减0.1度条带差异就很明显。

2、可以降一点退火温度。另外根据你模板序列有没有什么特点,可以根据这些特点,再选择适合的聚合酶。

3、引物参考文献,GC含量有点低,一个34.2%。TM值引物合成单上为45℃,另一个为50℃,但参考文献上退火温度为55℃,扩增目的片段260bp。
及时行乐,人生不留遗憾!
6楼2017-10-02 19:28:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
7楼2017-10-02 20:08:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

这里名字

新虫 (初入文坛)

我也是,做等温,咋做都没有目的片段

发自小木虫Android客户端
8楼2017-10-02 21:06:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiazhuangxue

新虫 (初入文坛)

9楼2018-01-11 15:22:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 新人求帮助 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 9/450 2026-11-02 03:26 by xzcv0Tehd8lQ
[基金申请] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 9/450 2026-11-02 03:24 by xzcv0Tehd8lQ
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 7/350 2026-11-02 03:18 by xzcv0Tehd8lQ
[基金申请] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 11/550 2026-11-02 03:13 by xzcv0Tehd8lQ
[考研] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 15/750 2026-11-02 02:58 by xzcv0Tehd8lQ
[博后之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 17/850 2026-11-02 02:45 by xzcv0Tehd8lQ
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 16/800 2026-11-02 02:45 by xzcv0Tehd8lQ
[基金申请] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 24/1200 2026-11-02 02:39 by xzcv0Tehd8lQ
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 16/800 2026-11-02 02:34 by xzcv0Tehd8lQ
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 7/350 2026-11-01 22:05 by xzcv0Tehd8lQ
[考博] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 7/350 2026-11-01 21:45 by xzcv0Tehd8lQ
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 5/250 2026-11-01 20:03 by xzcv0Tehd8lQ
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 6/300 2026-11-01 19:50 by xzcv0Tehd8lQ
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 13/650 2026-11-01 16:48 by BCdvBAEpt3zm
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 7/350 2026-11-01 12:40 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 10/500 2026-11-01 12:27 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 13/650 2026-11-01 12:14 by BCdvBAEpt3zm
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 5/250 2026-11-01 11:14 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 4/200 2026-11-01 11:01 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 申博自荐 2篇一区TOP+1篇EI+2公开发明专利 2027博士申请 +3 小小阿光 2026-10-27 3/150 2026-10-29 23:56 by 起风了的快乐
信息提示
请填处理意见