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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr没有条带
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新虫 (初入文坛)

[求助] pcr没有条带 已有1人参与

我有两条相同来源的基因序列，其功能也相似，但是其中一条扩增不出来，另一条却可以，模板是一样的基因组。扩增不出来的序列是1400bp左右，引物设计的是同源重组的引物，一条tm值是59.4，一条是62.6，我做梯度pcr从50到62都没有条带

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1楼 2017-10-02 17:55:35
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Mannix Li

新虫 (初入文坛)
既然pcr没有条带，那就要考虑是不是引物问题或者模板问题

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2楼2017-10-02 18:08:45
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Mannix Li

新虫 (初入文坛)
模板有可能被降解了，或者是引物本来就和你基因序列结合不上

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3楼2017-10-02 18:09:43
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新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Mannix Li at 2017-10-02 18:09:43
模板有可能被降解了，或者是引物本来就和你基因序列结合不上

模板肯定没有问题，因为我另外一条基因能p出来，引物是按照基因序列设计的，应该不会有问题的吧

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4楼2017-10-02 18:31:22
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香蕉芒果99

新虫 (小有名气)
多设计几条引物，筛选出可以用的。

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5楼2017-10-02 19:05:25
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-10-02 23:25:30
1、用梯度PCR跑，多加一些模板和上下游引物，文献里的退火温度也许并不适合你们实验室的条件，有时候增减0.1度条带差异就很明显。

2、可以降一点退火温度。另外根据你模板序列有没有什么特点，可以根据这些特点，再选择适合的聚合酶。

3、引物参考文献，GC含量有点低，一个34.2%。TM值引物合成单上为45℃，另一个为50℃，但参考文献上退火温度为55℃，扩增目的片段260bp。
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及时行乐，人生不留遗憾！
6楼2017-10-02 19:28:22
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oazkjp23


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7楼2017-10-02 20:08:12
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这里名字

新虫 (初入文坛)
我也是，做等温，咋做都没有目的片段

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8楼2017-10-02 21:06:41
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jiazhuangxue

新虫 (初入文坛)
换个酶吧，

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9楼2018-01-11 15:22:26
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