24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (3726)
>虫友互识 (737)
>导师招生 (273)
>文献求助 (230)
>硕博家园 (126)
>考博 (109)
>公派出国 (103)
>博后之家 (85)
>论文投稿 (82)
>休闲灌水 (78)
>基金申请 (77)
>找工作 (77)
>考研 (68)
>论文道贺祈福 (65)
>教师之家 (56)
>招聘信息布告栏 (47)

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

依米花樱花

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 204.8
散金: 10
帖子: 39
在线: 11.7小时
虫号: 5594312
注册: 2017-02-16
专业: 生物物理、生物化学与分子

[求助] 扩5kb的目的片段没出带已有1人参与

扩5000bp的目的条带，用的Pfu酶，电泳图显示没有条带，只有引物二聚体，哪位大神知道是怎么回事吖

发自小木虫Android客户端

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

融合PCR扩增不出目的条带已经有3人回复
蓝白斑筛选都是假阳性已经有7人回复
【原创】原创之六：环境样品总DNA的提取与纯化【已搜索无重复】已经有178人回复
【专题】PCR实验技术指南已经有535人回复

1楼 2017-10-02 16:40:52

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

依米花樱花

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 204.8
散金: 10
帖子: 39
在线: 11.7小时
虫号: 5594312
注册: 2017-02-16
专业: 生物物理、生物化学与分子

没有大神吗？

发自小木虫Android客户端

回复此楼

4楼2017-10-02 17:17:32

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 14 个回答

依米花樱花

新虫 (初入文坛)

？

发自小木虫Android客户端

2楼2017-10-02 16:44:08

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

ovwckf53

发自小木虫Android客户端

3楼2017-10-02 17:06:16

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

晋鹏

版主 (知名作家)

MolEPI: 6
应助: 626 (博士)
贵宾: 0.096
金币: 27590.2
散金: 1052
红花: 288
沙发: 2
帖子: 5663
在线: 726.4小时
虫号: 1183978
注册: 2011-01-05
性别: GG
专业: 生物信息学
管辖: 农林

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-10-02 23:26:42

1、5kb直接连接就好了，跟普通的一样。如果担心效率延长时间，调节好比例。

2、正常扩，延伸时间加长，多加点聚合酶，加上正负对照。如果还是扩不出来，检查模板，是不是降解了之类等等。

3、正常以质粒为模板的PCR是比较容易的，你先确定下质粒的质量和浓度，摸摸PCR的反应条件，可以试试宝生物的LATaq(长片段扩增酶)正常5K的话引物设计很关键，你可以考虑重新设计引物。