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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 扩5kb的目的片段没出带
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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依米花樱花

新虫 (初入文坛)

[求助] 扩5kb的目的片段没出带 已有1人参与

扩5000bp的目的条带，用的Pfu酶，电泳图显示没有条带，只有引物二聚体，哪位大神知道是怎么回事吖

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1楼 2017-10-02 16:40:52
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-10-02 23:26:42
1、5kb直接连接就好了，跟普通的一样。如果担心效率延长时间，调节好比例。

2、正常扩，延伸时间加长，多加点聚合酶，加上正负对照。如果还是扩不出来，检查模板，是不是降解了之类等等。

3、正常以质粒为模板的PCR是比较容易的，你先确定下质粒的质量和浓度，摸摸PCR的反应条件，可以试试宝生物的LATaq(长片段扩增酶)正常5K的话引物设计很关键，你可以考虑重新设计引物。
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及时行乐，人生不留遗憾！
5楼2017-10-02 19:29:44
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普通回帖

依米花樱花

新虫 (初入文坛)
？

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2楼2017-10-02 16:44:08
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ovwckf53


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3楼2017-10-02 17:06:16
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依米花樱花

新虫 (初入文坛)
没有大神吗？

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4楼2017-10-02 17:17:32
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czz19901230

新虫 (初入文坛)
退火温度多少？

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6楼2017-10-02 19:33:33
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oazkjp23


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7楼2017-10-02 20:03:56
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白话八股

金虫 (正式写手)
调整反应体系，换其他pcr酶

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最爱的那个人会出现在身边。
8楼2017-10-03 10:14:45
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嘣哆—abc

铁杆木虫 (著名写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-10-05 08:00:24
查一查你的5kb链的特征，试一试2步法！（但前提是1.常规的方法真的做不出来；2.引物能用，等等！）

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笃行，自信，奋进
9楼2017-10-03 20:47:42
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hzau103

新虫 (正式写手)
建议你先把，一些自己想到的已经做了的改正

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10楼2017-10-04 22:22:34
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