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依米花樱花

新虫 (初入文坛)

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[求助] 扩5kb的目的片段没出带已有1人参与

扩5000bp的目的条带，用的Pfu酶，电泳图显示没有条带，只有引物二聚体，哪位大神知道是怎么回事吖

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1楼 2017-10-02 16:40:52

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晋鹏

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【答案】应助回帖

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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-10-02 23:26:42

1、5kb直接连接就好了，跟普通的一样。如果担心效率延长时间，调节好比例。

2、正常扩，延伸时间加长，多加点聚合酶，加上正负对照。如果还是扩不出来，检查模板，是不是降解了之类等等。

3、正常以质粒为模板的PCR是比较容易的，你先确定下质粒的质量和浓度，摸摸PCR的反应条件，可以试试宝生物的LATaq(长片段扩增酶)正常5K的话引物设计很关键，你可以考虑重新设计引物。