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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于克隆
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galaxy_6

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于克隆

用已经确定含有目的片段的菌（经过克隆然后测序正确后扩大培养的菌）进行克隆，提取质粒后，进行PCR扩增，为什么不能扩增出目的片段出来呢？

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1楼 2017-09-20 07:50:35
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不吃M的鱼

金虫 (小有名气)
你这1ug的模板，电泳都能看到质粒条带了

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7楼2017-09-20 09:51:04
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紫陌骚年的爱

新虫 (初入文坛)
提取质粒作为模板，浓度要在10ng/ul 左右。请问，你稀释了吗？

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2楼2017-09-20 08:16:58
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galaxy_6

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 紫陌骚年的爱 at 2017-09-20 08:16:58
提取质粒作为模板，浓度要在10ng/ul 左右。请问，你稀释了吗？

我们是加了1μ的模板，总体系是25μ，浓度应该没有问题，因为有个师姐也是这样扩增的。就有结果，我们的不同就在于所用的菌的培养时间不同，我的是以前的，她的是新摇的

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3楼2017-09-20 09:00:33
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法式小面包

铜虫 (小有名气)
菌放时间长了质粒可能会降解，也有可能是你PCR试剂的问题

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4楼2017-09-20 09:10:39
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