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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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galaxy_6

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于克隆

用已经确定含有目的片段的菌(经过克隆然后测序正确后扩大培养的菌)进行克隆,提取质粒后,进行PCR扩增,为什么不能扩增出目的片段出来呢?

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法式小面包

铜虫 (小有名气)

菌放时间长了质粒可能会降解,也有可能是你PCR试剂的问题

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4楼2017-09-20 09:10:39
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紫陌骚年的爱

新虫 (初入文坛)

提取质粒作为模板,浓度要在10ng/ul 左右。请问,你稀释了吗?

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2楼2017-09-20 08:16:58
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galaxy_6

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 紫陌骚年的爱 at 2017-09-20 08:16:58
提取质粒作为模板,浓度要在10ng/ul 左右。请问,你稀释了吗?

我们是加了1μ的模板,总体系是25μ,浓度应该没有问题,因为有个师姐也是这样扩增的。就有结果,我们的不同就在于所用的菌的培养时间不同,我的是以前的,她的是新摇的

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3楼2017-09-20 09:00:33
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galaxy_6

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 法式小面包 at 2017-09-20 09:10:39
菌放时间长了质粒可能会降解,也有可能是你PCR试剂的问题

试剂不会有问题吧,因为我和那个师姐用的是同样的试剂

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5楼2017-09-20 09:17:43
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