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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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galaxy_6

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] 关于克隆

用已经确定含有目的片段的菌(经过克隆然后测序正确后扩大培养的菌)进行克隆,提取质粒后,进行PCR扩增,为什么不能扩增出目的片段出来呢?

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紫陌骚年的爱

兑换贵宾

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

提取质粒作为模板,浓度要在10ng/ul 左右。请问,你稀释了吗?

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2楼2017-09-20 08:16:58
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法式小面包

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

菌放时间长了质粒可能会降解,也有可能是你PCR试剂的问题

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4楼2017-09-20 09:10:39
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不吃M的鱼

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

你这1ug的模板,电泳都能看到质粒条带了

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7楼2017-09-20 09:51:04
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不吃M的鱼

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
8楼: Originally posted by galaxy_6 at 2017-09-20 09:54:39
是1μl
...

哦哦哦,那如果试剂没问题的话,模板可不可能污染了?其实不是你们的质粒了?可用用载体上通用引物测个序看看。质粒一般很好扩增的,我们模板用5ng,条带都贼亮贼亮的。

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9楼2017-09-20 09:59:38
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普通回帖

galaxy_6

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
2楼: Originally posted by 紫陌骚年的爱 at 2017-09-20 08:16:58
提取质粒作为模板,浓度要在10ng/ul 左右。请问,你稀释了吗?

我们是加了1μ的模板,总体系是25μ,浓度应该没有问题,因为有个师姐也是这样扩增的。就有结果,我们的不同就在于所用的菌的培养时间不同,我的是以前的,她的是新摇的

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3楼2017-09-20 09:00:33
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galaxy_6

兑换贵宾

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
4楼: Originally posted by 法式小面包 at 2017-09-20 09:10:39
菌放时间长了质粒可能会降解,也有可能是你PCR试剂的问题

试剂不会有问题吧,因为我和那个师姐用的是同样的试剂

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5楼2017-09-20 09:17:43
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galaxy_6

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
5楼: Originally posted by galaxy_6 at 2017-09-20 09:17:43
试剂不会有问题吧,因为我和那个师姐用的是同样的试剂
...

并且提取质粒后,电泳检测出来也是有质粒的

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6楼2017-09-20 09:20:46
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galaxy_6

兑换贵宾

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
7楼: Originally posted by 不吃M的鱼 at 2017-09-20 09:51:04
你这1ug的模板,电泳都能看到质粒条带了

是1μl

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8楼2017-09-20 09:54:39
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galaxy_6

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
9楼: Originally posted by 不吃M的鱼 at 2017-09-20 09:59:38
哦哦哦,那如果试剂没问题的话,模板可不可能污染了?其实不是你们的质粒了?可用用载体上通用引物测个序看看。质粒一般很好扩增的,我们模板用5ng,条带都贼亮贼亮的。
...

嗯嗯,但是那个质粒本来就是从已经测了序之后,扩大培养里面的菌里提取出来的,这样污染的可能性应该不是太大吧!

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10楼2017-09-20 10:25:41
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