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零星公寓

新虫 (小有名气)

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[交流] 求助SDS-PAGE电泳中的相关问题

我最近在做IPTG诱导，想通过SDS-PAGE电泳检测一下是否成功诱导出蛋白。但是在电泳过程中遇到一些问题，还请各位指教，谢谢。

我的目的蛋白大小在50kDa到70kDa之间，配胶是买的索莱宝公司的凝胶试剂盒，根据试剂盒中的说明书，选用的是5%的浓缩胶和10%的分离胶。电泳过程中遇到的问题如下：
1 上层浓缩胶灌入玻璃板并插入梳子之后，在浓缩胶层会出现与梳齿宽度相似的一条条不均匀竖条纹，请问是什么原因呢？
2 电泳接通电源之后，我先是用140V跑浓缩胶，然后用200V跑分离胶。但是跑出来的条带是斜着下来的（下面有照片）。
3 不光带是斜着跑下来的，15个胶孔每个孔都不是水平跑下来的，有的快，有的慢，这个正常吗？我一共是5个样本，其他的胶孔上的是与样本等体积的1×protein buffer 。很明显，5个样本跑的速度比其他上了1×protein buffer 跑出来的速度要快。

4 所有的条带都不是水平线，每一个胶孔上的样品都很乱，似乎不是很均匀，这个也是不正常的吧？

5 这个SDS-PAGE电泳我在北大实验室做的时候都没有出现以上这些问题。在北大实验室用的制胶试剂、电泳槽、电泳仪都与我们实验室的不同。（另外，北大实验室做的SDS-PAGE电泳自始至终电压都是200V，用200V的电压跑1h即可。我也试了一下，可是跑出来的带还是那个样子）如下图最后一张图片，是在北大实验室做的PAGE电泳图条带整齐划一，前面4张是我在本实验室做的电泳图片，条带层次不齐

还请各位前辈能给我一些建议，希望各位多多指教，谢谢大家