| 查看: 3277 | 回复: 21 | |||
[交流]
求助SDS-PAGE电泳中的相关问题
|
|||
|
我最近在做IPTG诱导，想通过SDS-PAGE电泳检测一下是否成功诱导出蛋白。但是在电泳过程中遇到一些问题，还请各位指教，谢谢。 我的目的蛋白大小在50kDa到70kDa之间，配胶是买的索莱宝公司的凝胶试剂盒，根据试剂盒中的说明书，选用的是5%的浓缩胶和10%的分离胶。电泳过程中遇到的问题如下： 1 上层浓缩胶灌入玻璃板并插入梳子之后，在浓缩胶层会出现与梳齿宽度相似的一条条不均匀竖条纹，请问是什么原因呢？ 2 电泳接通电源之后，我先是用140V跑浓缩胶，然后用200V跑分离胶。但是跑出来的条带是斜着下来的（下面有照片）。 3 不光带是斜着跑下来的，15个胶孔每个孔都不是水平跑下来的，有的快，有的慢，这个正常吗？我一共是5个样本，其他的胶孔上的是与样本等体积的1×protein buffer 。很明显，5个样本跑的速度比其他上了1×protein buffer 跑出来的速度要快。 4 所有的条带都不是水平线，每一个胶孔上的样品都很乱，似乎不是很均匀，这个也是不正常的吧？ 5 这个SDS-PAGE电泳我在北大实验室做的时候都没有出现以上这些问题。在北大实验室用的制胶试剂、电泳槽、电泳仪都与我们实验室的不同。（另外，北大实验室做的SDS-PAGE电泳自始至终电压都是200V，用200V的电压跑1h即可。我也试了一下，可是跑出来的带还是那个样子）如下图最后一张图片，是在北大实验室做的PAGE电泳图条带整齐划一，前面4张是我在本实验室做的电泳图片，条带层次不齐 还请各位前辈能给我一些建议，希望各位多多指教，谢谢大家      发自小木虫Android客户端 [ Last edited by 零星公寓 on 2017-9-18 at 21:00 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有81人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
9楼2017-09-19 01:32:04
14楼2017-09-19 10:50:42
2楼2017-09-18 20:57:52
3楼2017-09-18 20:58:00
4楼2017-09-18 20:58:21
5楼2017-09-18 20:58:24
6楼2017-09-18 20:59:03
7楼2017-09-18 21:34:59
8楼2017-09-18 22:01:22
10楼2017-09-19 07:10:51
28