应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 目的基因条带太浅怎么回收测序啊啊啊···
251/1返回列表
查看: 2506  |  回复: 24
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

婷宝宝2013

银虫 (小有名气)

[交流] 目的基因条带太浅怎么回收测序啊啊啊···

万能的小木虫大神们：
       请教一下我想用目的基因测序，但是所用菌株里目的基因的序列在NCBI上查不到，我就用了文献里的相关引物进行扩增。做了梯度PCR在基因组里扩出来了，但是条带很浅，无法进行后续的纯化或胶回收，肿么办啊？该从哪方面入手PCR还是合成引物？跪求大神们支招···
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2017-09-17 14:05:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

游在水里的鱼

银虫 (小有名气)
★
婷宝宝2013(金币+1): 谢谢参与
可以不回收，直接用这个当模版，在p一次

发自小木虫IOS客户端
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2017-09-17 14:12:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

非洲木棉

新虫 (初入文坛)
★
婷宝宝2013(金币+1): 谢谢参与
直接连接t载体，琼脂糖电泳与空载比对筛选后送测
赞一下(1人) 回复此楼
19楼2017-09-18 13:36:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

zuiaixuexi

至尊木虫 (文坛精英)
★
婷宝宝2013(金币+1): 谢谢参与
祝好运
回复此楼
3楼2017-09-17 14:23:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

守望者047

金虫 (小有名气)
★
婷宝宝2013(金币+1): 谢谢参与
直接以产物原液为模板再跑一次PCR

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2017-09-17 15:47:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

domopal

铁杆木虫 (正式写手)
★
婷宝宝2013(金币+1): 谢谢参与
记得稀释

发自小木虫Android客户端
回复此楼
7楼2017-09-17 19:17:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

婷宝宝2013

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 游在水里的鱼 at 2017-09-17 14:12:29
可以不回收，直接用这个当模版，在p一次

我试了，之前做的梯度，在有条带的几个温度里选了一个较好的，取PCR产物1ul为模板又P了一次，结果跑胶出来啥都没有了
赞一下 回复此楼
8楼2017-09-17 20:05:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

婷宝宝2013

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 守望者047 at 2017-09-17 15:47:02
直接以产物原液为模板再跑一次PCR

恩恩，取了1ul的产物为模板又做了一次，然而这次出来连之前淡淡的条带也没有了，是我哪里出错了吗
赞一下 回复此楼
9楼2017-09-17 20:07:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

婷宝宝2013

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by domopal at 2017-09-17 19:17:40
记得稀释

是什么要稀释啊？
回复此楼
10楼2017-09-17 20:07:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sony8620

铁杆木虫 (文学泰斗)
★
婷宝宝2013(金币+1): 谢谢参与
祝好

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
15楼2017-09-17 21:06:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黑胡椒牛排

新虫 (初入文坛)
★
婷宝宝2013(金币+1): 谢谢参与
扩完直接先连个通用载体，筛出来再测

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
16楼2017-09-17 21:57:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

婷宝宝2013

银虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 黑胡椒牛排 at 2017-09-17 21:57:40
扩完直接先连个通用载体，筛出来再测

里面引物二聚体很亮，还有杂带，不需要纯化或胶回收了吗？
赞一下 回复此楼
17楼2017-09-18 08:56:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黑胡椒牛排

新虫 (初入文坛)
菌检筛一下正确大小就好了

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
18楼2017-09-18 11:25:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

婷宝宝2013

银虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 非洲木棉 at 2017-09-18 13:36:23
直接连接t载体，琼脂糖电泳与空载比对筛选后送测

连T载前不是要纯化吗，之前有个很浅的条带纯化完跑胶看没有了
赞一下 回复此楼
20楼2017-09-21 08:55:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

婷宝宝2013

银虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 非洲木棉 at 2017-09-18 13:36:23
直接连接t载体，琼脂糖电泳与空载比对筛选后送测

连T载前不是得对PCR产物纯化吗，之前有个很暗的条带纯化完完全没有了
赞一下 回复此楼
21楼2017-09-21 08:56:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

婷宝宝2013

银虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 黑胡椒牛排 at 2017-09-18 11:25:28
菌检筛一下正确大小就好了

不用连t载直接纯化吗？
赞一下 回复此楼
22楼2017-09-21 08:58:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静静的泪滴

铜虫 (初入文坛)
★
婷宝宝2013(金币+1): 谢谢参与
1. 关于上面直接取1μl当模板做PCR是不可以的，需要稀释，用纯水稀释就可以，至少稀释30倍以上。不然至少会出现许多非特异性条带。
2. 实在没办法，链接T载体也算是个办法，有时候回收跑胶看不见带，不代表完全没有，可以连一下试试，虽然失败的可能性很大。
赞一下 回复此楼
23楼2017-09-28 14:59:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不语春秋

禁虫 (小有名气)
★
婷宝宝2013(金币+1): 谢谢参与
nono2009: 屏蔽内容, 违规存档 2017-10-23 06:28:54
本帖内容被屏蔽
24楼2017-10-20 14:54:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxh90

新虫 (著名写手)
★
婷宝宝2013(金币+1): 谢谢参与
再p一次

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
25楼2018-10-08 18:46:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
wdxmu5楼
2017-09-17 16:50   回复  
婷宝宝2013(金币+1): 谢谢参与
一 发自小木虫IOS客户端
gengxin606楼
2017-09-17 18:22   回复  
婷宝宝2013(金币+1): 谢谢参与
zhaoyan197811楼
2017-09-17 20:20   回复  
婷宝宝2013(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
slytjiaofei12楼
2017-09-17 20:31   回复  
婷宝宝2013(金币+1): 谢谢参与
syhorchid13楼
2017-09-17 20:41   回复  
婷宝宝2013(金币+1): 谢谢参与
dongmings14楼
2017-09-17 20:46   回复  
婷宝宝2013(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫IOS客户端
相关版块跳转 我要订阅楼主 婷宝宝2013 的主题更新
251/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +7 十三加油 2026-03-21 7/350 2026-03-23 23:48 by 热情沙漠
[考研] 材料调剂 +3 匹克i 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:18 by peike
[考研] 070300化学求调剂 +8 苑豆豆 2026-03-20 8/400 2026-03-23 20:57 by baobaoye
[考研] 0703化学求调剂 +4 奶油草莓. 2026-03-22 5/250 2026-03-23 19:37 by pswait
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪！？！
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +3 Promise-jyl 2026-03-23 3/150 2026-03-23 13:43 by wangkm
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 3/150 2026-03-23 10:32 by Iveryant
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 319求调剂 +4 小力气珂珂 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:53 by ColorlessPI
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 材料工程专硕 348分求调剂 +3 冬辞. 2026-03-17 5/250 2026-03-21 18:47 by 学员8dgXkO
[考研] 22 350 本科985求调剂，求老登收留 +3 李轶男003 2026-03-20 3/150 2026-03-21 13:28 by 搏击518
[考研] 求调剂 +6 Mqqqqqq 2026-03-19 6/300 2026-03-21 08:04 by JourneyLucky
[考研] 265求调剂 +3 Jack?k?y 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:17 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +6 www_q 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:56 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂求学校推荐 +3 伯乐29 2026-03-18 5/250 2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:15 by JourneyLucky
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +22 rare12345 2026-03-18 22/1100 2026-03-20 20:39 by zhukairuo
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭