| 查看: 4501 | 回复: 4 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
【蛋白质纯化】sumo+HIs-tag 用ulp1酶切后依旧挂Ni柱 已有1人参与
|
||
|
我的蛋白石结合SUMO和His-tag的，然后纯化后蛋白样进行了ULP1酶切，通过SDS-PAGE胶检测后知道，蛋白上的SUMO和His是切除了的（从条带大小可以看出来）。但是在此过Ni柱，穿出液里没有目标条带（按理说没有His-tag的蛋白不会和Ni柱结合，穿出液应该有目标条带，SUMO和His应该在N柱上），用10咪唑的Buffer洗脱后，目标条带还是没洗下来，1M咪唑洗全下来了。 酶切条件是4℃，过夜酶切（蛋白质不能室温酶切，怕热 会降解）是我切的时间太长了吗？或者说我应该用20mM、30mM的buffer洗脱吗？但是我纯化蛋白的时候40mM带His和SUMO的目标条带就会被洗下来了。。。 求大神指点迷津！！谢谢！！ SDS图见下↓↓↓  labuser 2017-09-14 109(浓、切、b、w10、s)_副本.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有141人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
candyazhen
新虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1336.1
- 帖子: 102
- 在线: 59.2小时
- 虫号: 1709202
- 注册: 2012-03-22
- 专业: 生物大分子结构与功能
5楼2018-01-24 13:54:02
hhz09423
金虫 (正式写手)
- 应助: 27 (小学生)
- 金币: 7649.8
- 红花: 1
- 帖子: 733
- 在线: 152.4小时
- 虫号: 2311244
- 注册: 2013-03-02
- 性别: GG
- 专业: 药理学其他科学问题
2楼2017-09-14 23:01:51
3楼2017-09-20 09:28:19
4楼2017-10-16 17:32:20
