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【蛋白质纯化】sumo+HIs-tag 用ulp1酶切后依旧挂Ni柱 已有1人参与
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我的蛋白石结合SUMO和His-tag的，然后纯化后蛋白样进行了ULP1酶切，通过SDS-PAGE胶检测后知道，蛋白上的SUMO和His是切除了的（从条带大小可以看出来）。但是在此过Ni柱，穿出液里没有目标条带（按理说没有His-tag的蛋白不会和Ni柱结合，穿出液应该有目标条带，SUMO和His应该在N柱上），用10咪唑的Buffer洗脱后，目标条带还是没洗下来，1M咪唑洗全下来了。 酶切条件是4℃，过夜酶切（蛋白质不能室温酶切，怕热 会降解）是我切的时间太长了吗？或者说我应该用20mM、30mM的buffer洗脱吗？但是我纯化蛋白的时候40mM带His和SUMO的目标条带就会被洗下来了。。。 求大神指点迷津！！谢谢！！ SDS图见下↓↓↓  labuser 2017-09-14 109(浓、切、b、w10、s)_副本.jpg |
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