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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 测序一直测不出
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了然小师弟

新虫 (初入文坛)

[求助] 测序一直测不出 已有1人参与

最近在把一个结核基因构建到大肠里，前面一直都很顺利，PCR产物测序也正确，后面的转化也P出了目的条带，但一旦测序就测不出来，重复了3次都是测不出，求大神帮忙解答

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1楼 2017-09-12 23:33:42
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
什么叫测不出来？是测序时显示没有插入片段还是测出来序列不对或是有突变？不知道你菌落pcr的时候做对照了没有？你可以在实验室把质粒提出来，酶切之后用你的引物去pcr，能p出来的话就直接送出去测序，如果对的话肯定就是对的，不对的话那就只能从做了
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···
7楼2017-09-15 09:11:31
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姣妹崽

新虫 (小有名气)
1.质粒验证选择片段内部酶切位点做酶切检测；2.换引物，在片段内部设计引物；3.送样尽量送质粒，不要送菌液；4.转化P出的目的条带可以测序试一试；5.换测序公司

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2楼2017-09-13 07:55:21
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了然小师弟

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 姣妹崽 at 2017-09-13 07:55:21
1.质粒验证选择片段内部酶切位点做酶切检测；2.换引物，在片段内部设计引物；3.送样尽量送质粒，不要送菌液；4.转化P出的目的条带可以测序试一试；5.换测序公司

谢谢大神

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3楼2017-09-13 09:59:16
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15885555334

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by 了然小师弟 at 2017-09-12 23:33:42
最近在把一个结核基因构建到大肠里，前面一直都很顺利，PCR产物测序也正确，后面的转化也P出了目的条带，但一旦测序就测不出来，重复了3次都是测不出，求大神帮忙解答
...

PcR怎么查的，能查细菌吗

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4楼2017-09-13 18:32:20
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