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了然小师弟

新虫 (初入文坛)

[求助] 测序一直测不出 已有1人参与

最近在把一个结核基因构建到大肠里,前面一直都很顺利,PCR产物测序也正确,后面的转化也P出了目的条带,但一旦测序就测不出来,重复了3次都是测不出,求大神帮忙解答

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姣妹崽

新虫 (小有名气)

1.质粒验证选择片段内部酶切位点做酶切检测;2.换引物,在片段内部设计引物;3.送样尽量送质粒,不要送菌液;4.转化P出的目的条带可以测序试一试;5.换测序公司

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2楼2017-09-13 07:55:21
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了然小师弟

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 姣妹崽 at 2017-09-13 07:55:21
1.质粒验证选择片段内部酶切位点做酶切检测;2.换引物,在片段内部设计引物;3.送样尽量送质粒,不要送菌液;4.转化P出的目的条带可以测序试一试;5.换测序公司

谢谢大神

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3楼2017-09-13 09:59:16
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15885555334

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
1楼: Originally posted by 了然小师弟 at 2017-09-12 23:33:42
最近在把一个结核基因构建到大肠里,前面一直都很顺利,PCR产物测序也正确,后面的转化也P出了目的条带,但一旦测序就测不出来,重复了3次都是测不出,求大神帮忙解答
...

PcR怎么查的,能查细菌吗

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4楼2017-09-13 18:32:20
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15885555334

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 15885555334 at 2017-09-13 18:32:20
PcR怎么查的,能查细菌吗
...

158855553342017-09-13 18:26:57楼主

4岁女孩感染发炎一年,化脓,查出革兰阳性球菌4加阴性杆菌4加,擦吃药都没用,为什么细菌陪养不出来,那里能做16SrDNA检查,还有什么检查能查出来。有知道的告诉一下,谢谢

,这个你们能查出来吗

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5楼2017-09-13 18:33:08
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小冀-

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引用回帖:
5楼: Originally posted by 15885555334 at 2017-09-13 18:33:08
158855553342017-09-13 18:26:57楼主
4岁女孩感染发炎一年,化脓,查出革兰阳性球菌4加阴性杆菌4加,擦吃药都没用,为什么细菌陪养不出来,那里能做16SrDNA检查,还有什么检查能查出来。有知道的告诉一下,谢谢
, ...

这个应该可以的,现在测人的基因组也就是口腔上皮细胞刮一刮就好了~既然是感染,又能检出细菌,应该能测,不过还得排除样品污染
···
6楼2017-09-15 09:09:09
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小冀-

版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
什么叫测不出来?是测序时显示没有插入片段还是测出来序列不对或是有突变?不知道你菌落pcr的时候做对照了没有?你可以在实验室把质粒提出来,酶切之后用你的引物去pcr,能p出来的话就直接送出去测序,如果对的话肯定就是对的,不对的话那就只能从做了
···
7楼2017-09-15 09:11:31
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