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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 稳转细胞株总是丢，怎么办？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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Ruby225

新虫 (小有名气)

[求助] 稳转细胞株总是丢，怎么办？ 已有1人参与

电转染或PEI转染293的细胞后，一种方式加筛选压力（puromycin  or  hygromycin），筛选后少量细胞存活，扩大培养后，发现没有阳性，另一种方式，转染后分单克隆，扩大培养后也检测不到阳性。原本转染24-72小时转染效率至少在50%，大部分可能是瞬转，但不会一个都没有整合到基因组吧，以前我用这种方法筛选成功过几株稳转株，但是最近一段时间都失败，有遇到类似情况的吗？想和大家交流交流

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1楼 2017-09-07 00:06:09
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
直接包个慢病毒感染下再分单克隆不就妥了么
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2楼2017-09-07 07:54:15
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Ruby225

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2017-09-07 07:54:15
直接包个慢病毒感染下再分单克隆不就妥了么

是的，现在马上就是做慢病毒，但是我想不明白，以前这样都能拿到高超稳转株，找不到原因

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3楼2017-09-07 08:06:43
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华人科学网

金虫 (小有名气)
可能还是整合的太少

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4楼2017-10-19 23:12:31
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ychmax

铁虫 (小有名气)
有时候这一基因有关系，有的基因是比较toxic的细胞比较容易排斥，或者细胞干脆就死了。所以你要注意哦

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爱生活就等于爱自己
5楼2018-01-19 16:54:18
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