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Ruby225

新虫 (小有名气)

[求助] 稳转细胞株总是丢,怎么办? 已有1人参与

电转染或PEI转染293的细胞后,一种方式加筛选压力(puromycin  or  hygromycin),筛选后少量细胞存活,扩大培养后,发现没有阳性,另一种方式,转染后分单克隆,扩大培养后也检测不到阳性。原本转染24-72小时转染效率至少在50%,大部分可能是瞬转,但不会一个都没有整合到基因组吧,以前我用这种方法筛选成功过几株稳转株,但是最近一段时间都失败,有遇到类似情况的吗?想和大家交流交流

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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
直接包个慢病毒感染下再分单克隆不就妥了么
2楼2017-09-07 07:54:15
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Ruby225

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2017-09-07 07:54:15
直接包个慢病毒感染下再分单克隆不就妥了么

是的,现在马上就是做慢病毒,但是我想不明白,以前这样都能拿到高超稳转株,找不到原因

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3楼2017-09-07 08:06:43
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华人科学网

金虫 (小有名气)

4楼2017-10-19 23:12:31
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ychmax

铁虫 (小有名气)

有时候这一基因有关系,有的基因是比较toxic的细胞比较容易排斥,或者细胞干脆就死了。所以你要注意哦

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爱生活就等于爱自己
5楼2018-01-19 16:54:18
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