应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问有没有做过甲基化的大神？有问题想问一下
51/1返回列表
查看: 750  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

qhiv6

新虫 (小有名气)

[交流] 请问有没有做过甲基化的大神？有问题想问一下 已有3人参与

首先，我要做的是BSP，已经提完基因组了，正在准备做重亚硫酸盐修饰，昨天做过一次，效果不好，甚至说很差，做过之后电泳没有条带，浓度低，估计测的也不是DNA浓度了，电泳都没有条带，也有可能降解了。
以上就是我做的描述，问题如下，
1，做完重亚硫酸盐修饰之后如何能验证修饰是否成功？只能是通过PCR，连载体测序么？
2，提的基因组浓度不太高，对修饰有没有影响？基本都在80-150ng/ul之间，修饰的时候用的是10ul，试剂盒用的是NEB的甲基化修饰试剂盒，都按说明书上操作。
3，过程中怎么能尽量使基因组少降解？
谢谢各位大神们！

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2017-08-12 12:48:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jie_1994

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
甲基化修饰过后的因为把C碱基变成了U碱基，所以应该是单链，无法电泳检测到的甲基化

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2017-08-21 17:12:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

lyzjc

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
交流下吧，在修饰完之后，电泳检测不出来的，一般都是直接拿修饰之后的基因组DNA，直接PCR，看PCR的效果如何。
我用的是zymo的试剂盒，提取的基因组浓度大概在200ng/ul，修饰所用基因组是20微升。没用过NEB试剂盒，不过一般按照说明书操作是没有问题的。
BS-PCR效果还不错。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

qhiv6
zhaijc@foxmail.com
2楼2017-08-19 09:59:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qhiv6

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by lyzjc at 2017-08-19 09:59:33
交流下吧，在修饰完之后，电泳检测不出来的，一般都是直接拿修饰之后的基因组DNA，直接PCR，看PCR的效果如何。
我用的是zymo的试剂盒，提取的基因组浓度大概在200ng/ul，修饰所用基因组是20微升。没用过NEB试剂盒， ...

哦，谢谢！！

发自小木虫Android客户端
回复此楼
3楼2017-08-19 20:28:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

251779193

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by lyzjc at 2017-08-19 09:59:33
交流下吧，在修饰完之后，电泳检测不出来的，一般都是直接拿修饰之后的基因组DNA，直接PCR，看PCR的效果如何。
我用的是zymo的试剂盒，提取的基因组浓度大概在200ng/ul，修饰所用基因组是20微升。没用过NEB试剂盒， ...

你好！那我用过zymo得到dna之后该怎么做？
赞一下 回复此楼
4楼2017-08-21 17:01:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 要骂人了，新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西，结果有个评委还在说凝练得不够 +5 瞬息宇宙 2026-08-31 8/400 2026-09-02 09:37 by 昵称告罄
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 8/400 2026-09-02 02:42 by Leogzhya
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 面上函评意见出来了，像什么等级？ 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +5 bjdxyxy 2026-08-26 5/250 2026-09-01 17:54 by 小伟大博士
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭