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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问有没有做过甲基化的大神？有问题想问一下
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qhiv6

新虫 (小有名气)

[交流] 请问有没有做过甲基化的大神？有问题想问一下 已有3人参与

首先，我要做的是BSP，已经提完基因组了，正在准备做重亚硫酸盐修饰，昨天做过一次，效果不好，甚至说很差，做过之后电泳没有条带，浓度低，估计测的也不是DNA浓度了，电泳都没有条带，也有可能降解了。
以上就是我做的描述，问题如下，
1，做完重亚硫酸盐修饰之后如何能验证修饰是否成功？只能是通过PCR，连载体测序么？
2，提的基因组浓度不太高，对修饰有没有影响？基本都在80-150ng/ul之间，修饰的时候用的是10ul，试剂盒用的是NEB的甲基化修饰试剂盒，都按说明书上操作。
3，过程中怎么能尽量使基因组少降解？
谢谢各位大神们！

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1楼 2017-08-12 12:48:21
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lyzjc

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
交流下吧，在修饰完之后，电泳检测不出来的，一般都是直接拿修饰之后的基因组DNA，直接PCR，看PCR的效果如何。
我用的是zymo的试剂盒，提取的基因组浓度大概在200ng/ul，修饰所用基因组是20微升。没用过NEB试剂盒，不过一般按照说明书操作是没有问题的。
BS-PCR效果还不错。
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qhiv6
zhaijc@foxmail.com
2楼2017-08-19 09:59:33
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qhiv6

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by lyzjc at 2017-08-19 09:59:33
交流下吧，在修饰完之后，电泳检测不出来的，一般都是直接拿修饰之后的基因组DNA，直接PCR，看PCR的效果如何。
我用的是zymo的试剂盒，提取的基因组浓度大概在200ng/ul，修饰所用基因组是20微升。没用过NEB试剂盒， ...

哦，谢谢！！

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3楼2017-08-19 20:28:25
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251779193

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by lyzjc at 2017-08-19 09:59:33
交流下吧，在修饰完之后，电泳检测不出来的，一般都是直接拿修饰之后的基因组DNA，直接PCR，看PCR的效果如何。
我用的是zymo的试剂盒，提取的基因组浓度大概在200ng/ul，修饰所用基因组是20微升。没用过NEB试剂盒， ...

你好！那我用过zymo得到dna之后该怎么做？
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4楼2017-08-21 17:01:55
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jie_1994

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
甲基化修饰过后的因为把C碱基变成了U碱基，所以应该是单链，无法电泳检测到的甲基化

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5楼2017-08-21 17:12:25
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