| 查看: 4730 | 回复: 7 | ||
钱塘幼麟木虫 (著名写手)
|
[求助]
摇菌6小时左右就目测浑浊了，是怎么回事？
|
|
构建质粒，经过酶切连接，再转化到大肠杆菌E.Coli。在有抗性的平板上挑取生长出来的单菌落，放到带有同样抗性的液体LB摇菌。37度，220转每分钟，大约6小时，就目测液体比较浑浊了。这是怎么了？（后来，我把未接种任何细菌的LB液体培养基置于同样的条件摇了约18小时，未见浑浊。） 用试剂盒提取质粒送去测序，得到的峰很杂乱，不能读出信息。在测序前，先用PCR根据构建了的质粒进行粗筛，得到了目的条带，但是部分质粒样品出现了非特异条带（目的条带约600bp，非特异条带约4000bp）。 估计质粒样品很不纯。请问我该怎样补救（得到一个意见：把提取的质粒样品再转化一次到大肠杆菌，同时提高筛选平板的抗生素浓度）？还是希望不再做一回酶切连接了。请各位大侠不吝赐教！ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有224人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
2楼2017-08-04 21:14:22
|
有杂带表明连接可能出问题，目的片段不纯，测序杂峰表明菌有问题，，如果连接产物没问题，可以划线，如果不能确定连接产物，最好重做，免得日后麻烦。。。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2017-08-05 09:37:25
钱塘幼麟
木虫 (著名写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 2442.5
- 散金: 2683
- 红花: 4
- 帖子: 1410
- 在线: 428.9小时
- 虫号: 1465615
- 注册: 2011-10-28
- 专业: 细胞信号转导
4楼2017-08-05 15:58:16
钱塘幼麟5楼2017-08-05 16:00:16
钱塘幼麟
木虫 (著名写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 2442.5
- 散金: 2683
- 红花: 4
- 帖子: 1410
- 在线: 428.9小时
- 虫号: 1465615
- 注册: 2011-10-28
- 专业: 细胞信号转导
6楼2017-08-07 00:11:30
钱塘幼麟
木虫 (著名写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 2442.5
- 散金: 2683
- 红花: 4
- 帖子: 1410
- 在线: 428.9小时
- 虫号: 1465615
- 注册: 2011-10-28
- 专业: 细胞信号转导
7楼2017-08-07 00:16:32
 |
8楼2017-08-19 11:57:39