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钱塘幼麟木虫 (著名写手)
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摇菌6小时左右就目测浑浊了，是怎么回事？
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构建质粒，经过酶切连接，再转化到大肠杆菌E.Coli。在有抗性的平板上挑取生长出来的单菌落，放到带有同样抗性的液体LB摇菌。37度，220转每分钟，大约6小时，就目测液体比较浑浊了。这是怎么了？（后来，我把未接种任何细菌的LB液体培养基置于同样的条件摇了约18小时，未见浑浊。） 用试剂盒提取质粒送去测序，得到的峰很杂乱，不能读出信息。在测序前，先用PCR根据构建了的质粒进行粗筛，得到了目的条带，但是部分质粒样品出现了非特异条带（目的条带约600bp，非特异条带约4000bp）。 估计质粒样品很不纯。请问我该怎样补救（得到一个意见：把提取的质粒样品再转化一次到大肠杆菌，同时提高筛选平板的抗生素浓度）？还是希望不再做一回酶切连接了。请各位大侠不吝赐教！ |
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钱塘幼麟
木虫 (著名写手)
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4楼2017-08-05 15:58:16
2楼2017-08-04 21:14:22
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有杂带表明连接可能出问题，目的片段不纯，测序杂峰表明菌有问题，，如果连接产物没问题，可以划线，如果不能确定连接产物，最好重做，免得日后麻烦。。。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2017-08-05 09:37:25
钱塘幼麟5楼2017-08-05 16:00:16