应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 非变性凝胶电泳蛋白条带分布在浓缩胶与分离胶之间
111/2返回列表12下一页
查看: 4745  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wuhao4850103

银虫 (著名写手)

[交流] 非变性凝胶电泳蛋白条带分布在浓缩胶与分离胶之间

我最近在跑非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，也就是常说的天然胶，分离胶的浓度是6%，蛋白分子量在15万左右，电泳电压160V，等溴酚蓝指示剂到达凝胶最前沿以后，把胶放在考马斯亮蓝R-250中染色3小时，然后用脱色液脱色，不过最后发现蛋白条带都分布在浓缩胶与分离胶交界的位置，给人感觉好像蛋白条带进入分离胶以后便停止运动了，不知道是什么原因，请大家帮忙分析一下，多谢了。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
嘻嘻哈哈
1楼 2017-08-01 22:40:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gy234

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
wuhao4850103: 金币+5 2018-10-15 20:28:26
引用回帖:
3楼: Originally posted by puluo-880312 at 2017-08-04 08:36:18
Native PAGE?由于没有SDS，需要根据样品自身电荷，所以分离胶与浓缩胶的pH很关键！电泳时间相对常规的SDS-PAGE要长。

你好 我最近在做Native PAGE 蛋白等电点10左右 分子量30KD左右 我用的分离胶pH8.8 浓缩胶6.8   电泳液pH8.8  啥也没跑出来   请问是哪里出问题了呢    第一次做  很多不太懂    求大神指教
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2018-05-23 21:25:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

gengxin60
2楼2017-08-03 20:42:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

puluo-880312

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
wuhao4850103: 金币+10 2017-08-06 14:13:40
Native PAGE?由于没有SDS，需要根据样品自身电荷，所以分离胶与浓缩胶的pH很关键！电泳时间相对常规的SDS-PAGE要长。
赞一下 回复此楼
3楼2017-08-04 08:36:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuhao4850103

银虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by puluo-880312 at 2017-08-04 08:36:18
Native PAGE?由于没有SDS，需要根据样品自身电荷，所以分离胶与浓缩胶的pH很关键！电泳时间相对常规的SDS-PAGE要长。

浓缩胶的pH是6.8，分离胶的pH是8.8，
赞一下 回复此楼
嘻嘻哈哈
4楼2017-08-06 14:15:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

puluo-880312

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
wuhao4850103: 金币+10 2017-10-17 15:28:32
引用回帖:
4楼: Originally posted by wuhao4850103 at 2017-08-06 14:15:09
浓缩胶的pH是6.8，分离胶的pH是8.8，...

样品的pI是多少？根据样品的pI要改变浓缩胶和分离胶的pH的，对酸性蛋白来说该pH没问题；此时常用的Marker没有确切意义了，做native PAGE通常需要相对较纯的样品，来判断样品是否有不同的构象等
赞一下 回复此楼
5楼2017-08-07 16:28:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuhao4850103

银虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by puluo-880312 at 2017-08-07 16:28:09
样品的pI是多少？根据样品的pI要改变浓缩胶和分离胶的pH的，对酸性蛋白来说该pH没问题；此时常用的Marker没有确切意义了，做native PAGE通常需要相对较纯的样品，来判断样品是否有不同的构象等...

是酸性蛋白，分子量在150KDa左右，

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
嘻嘻哈哈
6楼2017-08-09 00:10:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

RyanKai

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
wuhao4850103: 金币+5 2017-10-17 15:28:51
引用回帖:
6楼: Originally posted by wuhao4850103 at 2017-08-09 00:10:36
是酸性蛋白，分子量在150KDa左右，
...

怎么知道自己的蛋白是酸性的还是碱性的

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
7楼2017-10-16 22:55:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

辛辰昊

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by puluo-880312 at 2017-08-07 16:28:09
样品的pI是多少？根据样品的pI要改变浓缩胶和分离胶的pH的，对酸性蛋白来说该pH没问题；此时常用的Marker没有确切意义了，做native PAGE通常需要相对较纯的样品，来判断样品是否有不同的构象等...

您好！我的蛋白样品pI值一个是6.88，一个是5.59，用pH 6.8的浓缩胶和pH8.8的分离胶，请问这样可以吗？
赞一下 回复此楼
8楼2017-10-26 16:22:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuhao4850103

银虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by gy234 at 2018-05-23 21:25:33
你好 我最近在做Native PAGE 蛋白等电点10左右 分子量30KD左右 我用的分离胶pH8.8 浓缩胶6.8   电泳液pH8.8  啥也没跑出来   请问是哪里出问题了呢    第一次做  很多不太懂    求大神指教...

配制的分离胶的浓度是多少，
赞一下 回复此楼
嘻嘻哈哈
10楼2018-10-15 20:27:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wuhao4850103 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854电子信息求调剂 +5 α____ 2026-03-22 6/300 2026-03-24 17:42 by wmk
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +4 曼111 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:44 by 星空星月
[考研] 293求调剂 +6 加一一九 2026-03-24 6/300 2026-03-24 14:29 by JourneyLucky
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +7 生物工程调剂 2026-03-17 12/600 2026-03-23 18:18 by YMU施老师
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap－ 2026-03-22 9/450 2026-03-23 12:57 by yqdszhdap－
[考研] 333求调剂 +6 87639 2026-03-21 10/500 2026-03-23 10:41 by Iveryant
[考研] 276求调剂 +3 YNRYG 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:31 by 醉在风里
[考研] 323求调剂 +6 洼小桶 2026-03-18 6/300 2026-03-23 00:29 by king123！
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 一志愿华中科技大学071000，求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 材料工程专硕 348分求调剂 +3 冬辞. 2026-03-17 5/250 2026-03-21 18:47 by 学员8dgXkO
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 274求调剂 +10 S.H1 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:51 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 【同济软件】软件（085405）考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭