应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 非变性凝胶电泳蛋白条带分布在浓缩胶与分离胶之间
111/2返回列表12下一页
查看: 5002  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wuhao4850103

银虫 (著名写手)

[交流] 非变性凝胶电泳蛋白条带分布在浓缩胶与分离胶之间

我最近在跑非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，也就是常说的天然胶，分离胶的浓度是6%，蛋白分子量在15万左右，电泳电压160V，等溴酚蓝指示剂到达凝胶最前沿以后，把胶放在考马斯亮蓝R-250中染色3小时，然后用脱色液脱色，不过最后发现蛋白条带都分布在浓缩胶与分离胶交界的位置，给人感觉好像蛋白条带进入分离胶以后便停止运动了，不知道是什么原因，请大家帮忙分析一下，多谢了。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
嘻嘻哈哈
1楼 2017-08-01 22:40:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gy234

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
wuhao4850103: 金币+5 2018-10-15 20:28:26
引用回帖:
3楼: Originally posted by puluo-880312 at 2017-08-04 08:36:18
Native PAGE?由于没有SDS，需要根据样品自身电荷，所以分离胶与浓缩胶的pH很关键！电泳时间相对常规的SDS-PAGE要长。

你好 我最近在做Native PAGE 蛋白等电点10左右 分子量30KD左右 我用的分离胶pH8.8 浓缩胶6.8   电泳液pH8.8  啥也没跑出来   请问是哪里出问题了呢    第一次做  很多不太懂    求大神指教
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2018-05-23 21:25:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

gengxin60
2楼2017-08-03 20:42:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

puluo-880312

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
wuhao4850103: 金币+10 2017-08-06 14:13:40
Native PAGE?由于没有SDS，需要根据样品自身电荷，所以分离胶与浓缩胶的pH很关键！电泳时间相对常规的SDS-PAGE要长。
赞一下 回复此楼
3楼2017-08-04 08:36:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuhao4850103

银虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by puluo-880312 at 2017-08-04 08:36:18
Native PAGE?由于没有SDS，需要根据样品自身电荷，所以分离胶与浓缩胶的pH很关键！电泳时间相对常规的SDS-PAGE要长。

浓缩胶的pH是6.8，分离胶的pH是8.8，
赞一下 回复此楼
嘻嘻哈哈
4楼2017-08-06 14:15:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

puluo-880312

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
wuhao4850103: 金币+10 2017-10-17 15:28:32
引用回帖:
4楼: Originally posted by wuhao4850103 at 2017-08-06 14:15:09
浓缩胶的pH是6.8，分离胶的pH是8.8，...

样品的pI是多少？根据样品的pI要改变浓缩胶和分离胶的pH的，对酸性蛋白来说该pH没问题；此时常用的Marker没有确切意义了，做native PAGE通常需要相对较纯的样品，来判断样品是否有不同的构象等
赞一下 回复此楼
5楼2017-08-07 16:28:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuhao4850103

银虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by puluo-880312 at 2017-08-07 16:28:09
样品的pI是多少？根据样品的pI要改变浓缩胶和分离胶的pH的，对酸性蛋白来说该pH没问题；此时常用的Marker没有确切意义了，做native PAGE通常需要相对较纯的样品，来判断样品是否有不同的构象等...

是酸性蛋白，分子量在150KDa左右，

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
嘻嘻哈哈
6楼2017-08-09 00:10:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

RyanKai

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
wuhao4850103: 金币+5 2017-10-17 15:28:51
引用回帖:
6楼: Originally posted by wuhao4850103 at 2017-08-09 00:10:36
是酸性蛋白，分子量在150KDa左右，
...

怎么知道自己的蛋白是酸性的还是碱性的

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
7楼2017-10-16 22:55:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

辛辰昊

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by puluo-880312 at 2017-08-07 16:28:09
样品的pI是多少？根据样品的pI要改变浓缩胶和分离胶的pH的，对酸性蛋白来说该pH没问题；此时常用的Marker没有确切意义了，做native PAGE通常需要相对较纯的样品，来判断样品是否有不同的构象等...

您好！我的蛋白样品pI值一个是6.88，一个是5.59，用pH 6.8的浓缩胶和pH8.8的分离胶，请问这样可以吗？
赞一下 回复此楼
8楼2017-10-26 16:22:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuhao4850103

银虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by gy234 at 2018-05-23 21:25:33
你好 我最近在做Native PAGE 蛋白等电点10左右 分子量30KD左右 我用的分离胶pH8.8 浓缩胶6.8   电泳液pH8.8  啥也没跑出来   请问是哪里出问题了呢    第一次做  很多不太懂    求大神指教...

配制的分离胶的浓度是多少，
赞一下 回复此楼
嘻嘻哈哈
10楼2018-10-15 20:27:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wuhao4850103 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 wsYGJnURYvm6 2026-08-31 3/150 2026-09-01 01:40 by o3EMxHUAQDtS
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭