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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 非变性凝胶电泳蛋白条带分布在浓缩胶与分离胶之间
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wuhao4850103

银虫 (著名写手)

[交流] 非变性凝胶电泳蛋白条带分布在浓缩胶与分离胶之间

我最近在跑非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，也就是常说的天然胶，分离胶的浓度是6%，蛋白分子量在15万左右，电泳电压160V，等溴酚蓝指示剂到达凝胶最前沿以后，把胶放在考马斯亮蓝R-250中染色3小时，然后用脱色液脱色，不过最后发现蛋白条带都分布在浓缩胶与分离胶交界的位置，给人感觉好像蛋白条带进入分离胶以后便停止运动了，不知道是什么原因，请大家帮忙分析一下，多谢了。
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1楼 2017-08-01 22:40:31
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gy234

新虫 (初入文坛)
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wuhao4850103: 金币+5 2018-10-15 20:28:26
引用回帖:
3楼: Originally posted by puluo-880312 at 2017-08-04 08:36:18
Native PAGE?由于没有SDS，需要根据样品自身电荷，所以分离胶与浓缩胶的pH很关键！电泳时间相对常规的SDS-PAGE要长。

你好 我最近在做Native PAGE 蛋白等电点10左右 分子量30KD左右 我用的分离胶pH8.8 浓缩胶6.8   电泳液pH8.8  啥也没跑出来   请问是哪里出问题了呢    第一次做  很多不太懂    求大神指教
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9楼2018-05-23 21:25:33
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gengxin60
2楼2017-08-03 20:42:47
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puluo-880312

木虫 (正式写手)
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wuhao4850103: 金币+10 2017-08-06 14:13:40
Native PAGE?由于没有SDS，需要根据样品自身电荷，所以分离胶与浓缩胶的pH很关键！电泳时间相对常规的SDS-PAGE要长。
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3楼2017-08-04 08:36:18
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wuhao4850103

银虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by puluo-880312 at 2017-08-04 08:36:18
Native PAGE?由于没有SDS，需要根据样品自身电荷，所以分离胶与浓缩胶的pH很关键！电泳时间相对常规的SDS-PAGE要长。

浓缩胶的pH是6.8，分离胶的pH是8.8，
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4楼2017-08-06 14:15:09
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puluo-880312

木虫 (正式写手)
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wuhao4850103: 金币+10 2017-10-17 15:28:32
引用回帖:
4楼: Originally posted by wuhao4850103 at 2017-08-06 14:15:09
浓缩胶的pH是6.8，分离胶的pH是8.8，...

样品的pI是多少？根据样品的pI要改变浓缩胶和分离胶的pH的，对酸性蛋白来说该pH没问题；此时常用的Marker没有确切意义了，做native PAGE通常需要相对较纯的样品，来判断样品是否有不同的构象等
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5楼2017-08-07 16:28:09
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wuhao4850103

银虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by puluo-880312 at 2017-08-07 16:28:09
样品的pI是多少？根据样品的pI要改变浓缩胶和分离胶的pH的，对酸性蛋白来说该pH没问题；此时常用的Marker没有确切意义了，做native PAGE通常需要相对较纯的样品，来判断样品是否有不同的构象等...

是酸性蛋白，分子量在150KDa左右，

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6楼2017-08-09 00:10:36
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RyanKai

新虫 (小有名气)
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wuhao4850103: 金币+5 2017-10-17 15:28:51
引用回帖:
6楼: Originally posted by wuhao4850103 at 2017-08-09 00:10:36
是酸性蛋白，分子量在150KDa左右，
...

怎么知道自己的蛋白是酸性的还是碱性的

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7楼2017-10-16 22:55:16
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辛辰昊

金虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by puluo-880312 at 2017-08-07 16:28:09
样品的pI是多少？根据样品的pI要改变浓缩胶和分离胶的pH的，对酸性蛋白来说该pH没问题；此时常用的Marker没有确切意义了，做native PAGE通常需要相对较纯的样品，来判断样品是否有不同的构象等...

您好！我的蛋白样品pI值一个是6.88，一个是5.59，用pH 6.8的浓缩胶和pH8.8的分离胶，请问这样可以吗？
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8楼2017-10-26 16:22:44
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wuhao4850103

银虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by gy234 at 2018-05-23 21:25:33
你好 我最近在做Native PAGE 蛋白等电点10左右 分子量30KD左右 我用的分离胶pH8.8 浓缩胶6.8   电泳液pH8.8  啥也没跑出来   请问是哪里出问题了呢    第一次做  很多不太懂    求大神指教...

配制的分离胶的浓度是多少，
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10楼2018-10-15 20:27:55
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