24小时热门版块排行榜    

查看: 4750  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wuhao4850103

银虫 (著名写手)

[交流] 非变性凝胶电泳蛋白条带分布在浓缩胶与分离胶之间

我最近在跑非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,也就是常说的天然胶,分离胶的浓度是6%,蛋白分子量在15万左右,电泳电压160V,等溴酚蓝指示剂到达凝胶最前沿以后,把胶放在考马斯亮蓝R-250中染色3小时,然后用脱色液脱色,不过最后发现蛋白条带都分布在浓缩胶与分离胶交界的位置,给人感觉好像蛋白条带进入分离胶以后便停止运动了,不知道是什么原因,请大家帮忙分析一下,多谢了。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

嘻嘻哈哈
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuhao4850103

银虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by puluo-880312 at 2017-08-04 08:36:18
Native PAGE?由于没有SDS,需要根据样品自身电荷,所以分离胶与浓缩胶的pH很关键!电泳时间相对常规的SDS-PAGE要长。

浓缩胶的pH是6.8,分离胶的pH是8.8,
嘻嘻哈哈
4楼2017-08-06 14:15:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

puluo-880312

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
wuhao4850103: 金币+10 2017-08-06 14:13:40
Native PAGE?由于没有SDS,需要根据样品自身电荷,所以分离胶与浓缩胶的pH很关键!电泳时间相对常规的SDS-PAGE要长。
3楼2017-08-04 08:36:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

puluo-880312

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
wuhao4850103: 金币+10 2017-10-17 15:28:32
引用回帖:
4楼: Originally posted by wuhao4850103 at 2017-08-06 14:15:09
浓缩胶的pH是6.8,分离胶的pH是8.8,...

样品的pI是多少?根据样品的pI要改变浓缩胶和分离胶的pH的,对酸性蛋白来说该pH没问题;此时常用的Marker没有确切意义了,做native PAGE通常需要相对较纯的样品,来判断样品是否有不同的构象等
5楼2017-08-07 16:28:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuhao4850103

银虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by puluo-880312 at 2017-08-07 16:28:09
样品的pI是多少?根据样品的pI要改变浓缩胶和分离胶的pH的,对酸性蛋白来说该pH没问题;此时常用的Marker没有确切意义了,做native PAGE通常需要相对较纯的样品,来判断样品是否有不同的构象等...

是酸性蛋白,分子量在150KDa左右,

发自小木虫Android客户端
嘻嘻哈哈
6楼2017-08-09 00:10:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
[考研] 281求调剂 +3 Koxui 2026-03-24 4/200 2026-03-24 22:59 by barlinike
[考研] 340求调剂 +4 话梅糖111 2026-03-24 4/200 2026-03-24 21:41 by yuyu98412
[考研] 求调剂323材料与化工 +3 1124361 2026-03-24 3/150 2026-03-24 20:24 by peike
[考研] 289求调剂 +8 硕星赴 2026-03-23 8/400 2026-03-24 20:17 by peike
[考研] 收08调剂生 +6 komorebi69 2026-03-18 6/300 2026-03-24 19:09 by 汪!?!
[考研] 求调剂 +6 研研,接电话 2026-03-24 7/350 2026-03-24 17:01 by barlinike
[考研] 299求调剂 +7 某某某某位 2026-03-21 7/350 2026-03-24 15:24 by cuifj
[考研] 284求调剂 +10 Zhao anqi 2026-03-22 10/500 2026-03-24 00:08 by Equinoxhua
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 361求调剂 +3 Glack 2026-03-22 3/150 2026-03-23 22:03 by fuyu_
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪!?!
[考研] 298求调剂 +8 上岸6666@ 2026-03-20 8/400 2026-03-23 11:02 by laoshidan
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
信息提示
请填处理意见