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wuhao4850103

银虫 (著名写手)

[交流] 非变性凝胶电泳蛋白条带分布在浓缩胶与分离胶之间

我最近在跑非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,也就是常说的天然胶,分离胶的浓度是6%,蛋白分子量在15万左右,电泳电压160V,等溴酚蓝指示剂到达凝胶最前沿以后,把胶放在考马斯亮蓝R-250中染色3小时,然后用脱色液脱色,不过最后发现蛋白条带都分布在浓缩胶与分离胶交界的位置,给人感觉好像蛋白条带进入分离胶以后便停止运动了,不知道是什么原因,请大家帮忙分析一下,多谢了。
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wuhao4850103

银虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by puluo-880312 at 2017-08-04 08:36:18
Native PAGE?由于没有SDS,需要根据样品自身电荷,所以分离胶与浓缩胶的pH很关键!电泳时间相对常规的SDS-PAGE要长。

浓缩胶的pH是6.8,分离胶的pH是8.8,
嘻嘻哈哈
4楼2017-08-06 14:15:09
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puluo-880312

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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wuhao4850103: 金币+10 2017-08-06 14:13:40
Native PAGE?由于没有SDS,需要根据样品自身电荷,所以分离胶与浓缩胶的pH很关键!电泳时间相对常规的SDS-PAGE要长。
3楼2017-08-04 08:36:18
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puluo-880312

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
wuhao4850103: 金币+10 2017-10-17 15:28:32
引用回帖:
4楼: Originally posted by wuhao4850103 at 2017-08-06 14:15:09
浓缩胶的pH是6.8,分离胶的pH是8.8,...

样品的pI是多少?根据样品的pI要改变浓缩胶和分离胶的pH的,对酸性蛋白来说该pH没问题;此时常用的Marker没有确切意义了,做native PAGE通常需要相对较纯的样品,来判断样品是否有不同的构象等
5楼2017-08-07 16:28:09
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wuhao4850103

银虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by puluo-880312 at 2017-08-07 16:28:09
样品的pI是多少?根据样品的pI要改变浓缩胶和分离胶的pH的,对酸性蛋白来说该pH没问题;此时常用的Marker没有确切意义了,做native PAGE通常需要相对较纯的样品,来判断样品是否有不同的构象等...

是酸性蛋白,分子量在150KDa左右,

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嘻嘻哈哈
6楼2017-08-09 00:10:36
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