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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » gateway中'LR反应
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小豆同学

新虫 (初入文坛)

[求助] gateway中'LR反应 已有2人参与

做该反应时对感受态有什么要求吗望告知，我有DH5&感受态和TransDB3.1的感受态，分不清用哪个了

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1楼 2017-08-01 16:01:50
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

伤何处

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-04 07:42:56
DB3.1是用于转化空载gateway载体的，因为载体上含有ccdB致死基因，只能在DB3.1菌株中扩繁。像BP,LR之后的产物 是直接转DH5a的
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对也罢，错也罢；正也罢，逆也罢；通途也好，崎岖无妨……但问，吾心坚否？若坚，纵使歧路，以铁心，贯穿而过，亦为大道！不坚，便是坦途，也难登临绝顶，观险峰
8楼2017-08-04 00:42:35
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普通回帖

晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+5, 鼓励回帖交流 2017-08-04 07:42:40
Gateway技术是克隆和亚克隆DNA序列的一项新颖的通用系统，便于功能基因的分析和蛋白质的表达。一旦进入这个多功能的操作系统，DNA片段可以通过位点特异的重组在载体之间转移。
Gateway技术是基于已研究的非常清楚的λ噬菌体位点特异重组系统（attB x attP →attL x attR）。BP和LR两个反应就构成搜索了Gateway技术. BP反应是利用一个attB DNA片段或表达克隆和一个attP供体载体之间的重组反应，创建一个入门克隆。LR反应是一个attL入门克隆和一个attR目的载体之间的重组反应。LR反应用来在平行的反应中转移目的序列到一个或更多个目的载体。
在BP反应中基因转移形成入门克隆，在LR反应中入门克隆可以作为反应物产生最终的表达克隆。
完成构建Gateway表达克隆仅需两步：
（1）创建入门克隆，通过PCR或传统的克隆方法将目的基因克隆进入门载体。
（2）混合包含目的基因的入门克隆和合适的目的载体以及Gateway LR Clonase酶，构建表达克隆。（表达克隆用来在合适的宿主中进行蛋白的表达和分析。）
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及时行乐，人生不留遗憾！
2楼2017-08-01 16:07:36
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小豆同学

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-08-01 16:07:36
Gateway技术是克隆和亚克隆DNA序列的一项新颖的通用系统，便于功能基因的分析和蛋白质的表达。一旦进入这个多功能的操作系统，DNA片段可以通过位点特异的重组在载体之间转移。
Gateway技术是基于已研究的非常清楚的 ...

您好，我LR反应已经连接好了，做饭转化了，用的感受态细胞有要求吗？我忘了使用哪一种了

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3楼2017-08-01 16:13:29
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只想对你说

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-08-01 16:07:36
Gateway技术是克隆和亚克隆DNA序列的一项新颖的通用系统，便于功能基因的分析和蛋白质的表达。一旦进入这个多功能的操作系统，DNA片段可以通过位点特异的重组在载体之间转移。
Gateway技术是基于已研究的非常清楚的 ...

这是我做的时候用的，希望能帮助到你
gateway中'LR反应



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4楼2017-08-01 16:32:32
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晋鹏

版主 (知名作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小豆同学 at 2017-08-01 16:13:29
您好，我LR反应已经连接好了，做饭转化了，用的感受态细胞有要求吗？我忘了使用哪一种了
...

GV3101
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及时行乐，人生不留遗憾！
5楼2017-08-01 16:35:19
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晋鹏

版主 (知名作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小豆同学 at 2017-08-01 16:13:29
您好，我LR反应已经连接好了，做饭转化了，用的感受态细胞有要求吗？我忘了使用哪一种了
...

DH5&感受态 就可以了
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及时行乐，人生不留遗憾！
6楼2017-08-01 16:35:42
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小豆同学

新虫 (初入文坛)
好嘞

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7楼2017-08-02 13:14:02
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小豆同学

新虫 (初入文坛)
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8楼: Originally posted by 伤何处 at 2017-08-04 00:42:35
DB3.1是用于转化空载gateway载体的，因为载体上含有ccdB致死基因，只能在DB3.1菌株中扩繁。像BP,LR之后的产物 是直接转DH5a的

嗯嗯，很有用，谢谢

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9楼2017-08-05 04:41:26
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pepepe

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 伤何处 at 2017-08-04 00:42:35
DB3.1是用于转化空载gateway载体的，因为载体上含有ccdB致死基因，只能在DB3.1菌株中扩繁。像BP,LR之后的产物 是直接转DH5a的

您好，想向您请教一些问题，我购买的DB3.1感受态，转gateway 空载不长，转不含ccdB基因的载体就能长，这感受态是有问题吗？

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10楼2017-08-10 00:48:31
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