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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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小豆同学

新虫 (初入文坛)

[求助] gateway中'LR反应 已有2人参与

做该反应时对感受态有什么要求吗望告知,我有DH5&感受态和TransDB3.1的感受态,分不清用哪个了

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伤何处

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-04 07:42:56
DB3.1是用于转化空载gateway载体的,因为载体上含有ccdB致死基因,只能在DB3.1菌株中扩繁。像BP,LR之后的产物 是直接转DH5a的
对也罢,错也罢;正也罢,逆也罢;通途也好,崎岖无妨……但问,吾心坚否?若坚,纵使歧路,以铁心,贯穿而过,亦为大道!不坚,便是坦途,也难登临绝顶,观险峰
8楼2017-08-04 00:42:35
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+5, 鼓励回帖交流 2017-08-04 07:42:40
Gateway技术是克隆和亚克隆DNA序列的一项新颖的通用系统,便于功能基因的分析和蛋白质的表达。一旦进入这个多功能的操作系统,DNA片段可以通过位点特异的重组在载体之间转移。
Gateway技术是基于已研究的非常清楚的λ噬菌体位点特异重组系统(attB x attP →attL x attR)。BP和LR两个反应就构成搜索了Gateway技术. BP反应是利用一个attB DNA片段或表达克隆和一个attP供体载体之间的重组反应,创建一个入门克隆。LR反应是一个attL入门克隆和一个attR目的载体之间的重组反应。LR反应用来在平行的反应中转移目的序列到一个或更多个目的载体。
在BP反应中基因转移形成入门克隆,在LR反应中入门克隆可以作为反应物产生最终的表达克隆。
完成构建Gateway表达克隆仅需两步:
(1)创建入门克隆,通过PCR或传统的克隆方法将目的基因克隆进入门载体。
(2)混合包含目的基因的入门克隆和合适的目的载体以及Gateway LR Clonase酶,构建表达克隆。(表达克隆用来在合适的宿主中进行蛋白的表达和分析。)
及时行乐,人生不留遗憾!
2楼2017-08-01 16:07:36
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小豆同学

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-08-01 16:07:36
Gateway技术是克隆和亚克隆DNA序列的一项新颖的通用系统,便于功能基因的分析和蛋白质的表达。一旦进入这个多功能的操作系统,DNA片段可以通过位点特异的重组在载体之间转移。
Gateway技术是基于已研究的非常清楚的 ...

您好,我LR反应已经连接好了,做饭转化了,用的感受态细胞有要求吗?我忘了使用哪一种了

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3楼2017-08-01 16:13:29
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只想对你说

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-08-01 16:07:36
Gateway技术是克隆和亚克隆DNA序列的一项新颖的通用系统,便于功能基因的分析和蛋白质的表达。一旦进入这个多功能的操作系统,DNA片段可以通过位点特异的重组在载体之间转移。
Gateway技术是基于已研究的非常清楚的 ...

这是我做的时候用的,希望能帮助到你
gateway中'LR反应



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4楼2017-08-01 16:32:32
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晋鹏

版主 (知名作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小豆同学 at 2017-08-01 16:13:29
您好,我LR反应已经连接好了,做饭转化了,用的感受态细胞有要求吗?我忘了使用哪一种了
...

GV3101
及时行乐,人生不留遗憾!
5楼2017-08-01 16:35:19
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晋鹏

版主 (知名作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小豆同学 at 2017-08-01 16:13:29
您好,我LR反应已经连接好了,做饭转化了,用的感受态细胞有要求吗?我忘了使用哪一种了
...

DH5&感受态 就可以了
及时行乐,人生不留遗憾!
6楼2017-08-01 16:35:42
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小豆同学

新虫 (初入文坛)

7楼2017-08-02 13:14:02
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小豆同学

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 伤何处 at 2017-08-04 00:42:35
DB3.1是用于转化空载gateway载体的,因为载体上含有ccdB致死基因,只能在DB3.1菌株中扩繁。像BP,LR之后的产物 是直接转DH5a的

嗯嗯,很有用,谢谢

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9楼2017-08-05 04:41:26
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pepepe

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 伤何处 at 2017-08-04 00:42:35
DB3.1是用于转化空载gateway载体的,因为载体上含有ccdB致死基因,只能在DB3.1菌株中扩繁。像BP,LR之后的产物 是直接转DH5a的

您好,想向您请教一些问题,我购买的DB3.1感受态,转gateway 空载不长,转不含ccdB基因的载体就能长,这感受态是有问题吗?

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10楼2017-08-10 00:48:31
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