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小豆同学

新虫 (初入文坛)

[求助] gateway中'LR反应 已有2人参与

做该反应时对感受态有什么要求吗望告知,我有DH5&感受态和TransDB3.1的感受态,分不清用哪个了

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只想对你说

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-08-01 16:07:36
Gateway技术是克隆和亚克隆DNA序列的一项新颖的通用系统,便于功能基因的分析和蛋白质的表达。一旦进入这个多功能的操作系统,DNA片段可以通过位点特异的重组在载体之间转移。
Gateway技术是基于已研究的非常清楚的 ...

这是我做的时候用的,希望能帮助到你
gateway中'LR反应



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4楼2017-08-01 16:32:32
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查看全部 13 个回答

晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+5, 鼓励回帖交流 2017-08-04 07:42:40
Gateway技术是克隆和亚克隆DNA序列的一项新颖的通用系统,便于功能基因的分析和蛋白质的表达。一旦进入这个多功能的操作系统,DNA片段可以通过位点特异的重组在载体之间转移。
Gateway技术是基于已研究的非常清楚的λ噬菌体位点特异重组系统(attB x attP →attL x attR)。BP和LR两个反应就构成搜索了Gateway技术. BP反应是利用一个attB DNA片段或表达克隆和一个attP供体载体之间的重组反应,创建一个入门克隆。LR反应是一个attL入门克隆和一个attR目的载体之间的重组反应。LR反应用来在平行的反应中转移目的序列到一个或更多个目的载体。
在BP反应中基因转移形成入门克隆,在LR反应中入门克隆可以作为反应物产生最终的表达克隆。
完成构建Gateway表达克隆仅需两步:
(1)创建入门克隆,通过PCR或传统的克隆方法将目的基因克隆进入门载体。
(2)混合包含目的基因的入门克隆和合适的目的载体以及Gateway LR Clonase酶,构建表达克隆。(表达克隆用来在合适的宿主中进行蛋白的表达和分析。)
及时行乐,人生不留遗憾!
2楼2017-08-01 16:07:36
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小豆同学

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-08-01 16:07:36
Gateway技术是克隆和亚克隆DNA序列的一项新颖的通用系统,便于功能基因的分析和蛋白质的表达。一旦进入这个多功能的操作系统,DNA片段可以通过位点特异的重组在载体之间转移。
Gateway技术是基于已研究的非常清楚的 ...

您好,我LR反应已经连接好了,做饭转化了,用的感受态细胞有要求吗?我忘了使用哪一种了

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3楼2017-08-01 16:13:29
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晋鹏

版主 (知名作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小豆同学 at 2017-08-01 16:13:29
您好,我LR反应已经连接好了,做饭转化了,用的感受态细胞有要求吗?我忘了使用哪一种了
...

GV3101
及时行乐,人生不留遗憾!
5楼2017-08-01 16:35:19
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