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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 拟南芥突变体互补试验
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shiliyusly

新虫 (小有名气)

[求助] 拟南芥突变体互补试验 已有1人参与

大家好！关于拟南芥突变体互补试验，我有个困惑，期待大牛们能帮我解答下，大谢啊！
互补试验中，T1代抗性拟南芥到底能不能出现缺失的表型？
我找到的几篇SCI文章都是说T1代就出现了表型的，表型还相当的明显！
但是理论上花序侵染法中，农杆菌只侵染雌配子体，所以所有的T1代苗都是杂合子Aa，但表型应该不会很明显啊？并且我实验得到的T1代也都没有表型。
请问，T1代抗性植株可能出现明显的表型吗？什么情况出现？几率大吗？
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1楼 2017-07-26 11:20:34
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-07-27 07:47:43
取决于转入的拷贝数以及启动子的强度。如果用35S强启动子，基本上都会有表型出现，除非你插入的基因序列出了问题，如果是基因本身的启动子，强度太低，插入的拷贝数也低的话，有可能不会出现明显的表型。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

shiliyusly
。
2楼2017-07-26 15:14:11
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shiliyusly

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2017-07-26 15:14:11
取决于转入的拷贝数以及启动子的强度。如果用35S强启动子，基本上都会有表型出现，除非你插入的基因序列出了问题，如果是基因本身的启动子，强度太低，插入的拷贝数也低的话，有可能不会出现明显的表型。

谢谢你！你说的拷贝数，是指单拷贝，多拷贝插入吗？只有单拷贝插入才有性状分离。你的意思是多拷贝插入会出现明显性状吗？关于多拷贝插入这块我不是很懂

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3楼2017-07-26 15:46:16
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-27 07:48:00
引用回帖:
3楼: Originally posted by shiliyusly at 2017-07-26 15:46:16
谢谢你！你说的拷贝数，是指单拷贝，多拷贝插入吗？只有单拷贝插入才有性状分离。你的意思是多拷贝插入会出现明显性状吗？关于多拷贝插入这块我不是很懂
...

插入拷贝数越多，基因的表达强度越高，得到的表型当然越明显。如果你做的互补突变T1没有表型，做个定量先检测一下基因的转录水平，排除基因没有表达的问题。如果基因的表达没有问题，那就要考虑其他的因素了。
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。
4楼2017-07-26 16:02:01
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shiliyusly: 金币+8, ★★★★★最佳答案 2017-07-26 19:32:32
shiliyusly: 金币+6, ★★★★★最佳答案 2017-07-26 19:36:06
你要互补的基因突变是否只在纯合的情况下才能观察到表型， 如果答案为”是“， 那么理论上T1代转基因植物应该观察到表型互补的。当然，各个T1植物之间转基因的插入位点是随机的 ， 表达量也会有差异， 出现一些个体没有表型很正常。但是， 如果你观察了大于30株左右T1都没有看到预期的表型， 我认为最有可能出现下列情况：
1） 先确定转基因植物不是其它植株污染（你使用的转基因构件确确实实在T1植物体内）
2） 构件的启动子不正确，没有在正确的细胞里面表达
3） 引起表型的突变和你研究的基因无关
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5楼2017-07-26 18:18:33
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shiliyusly

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2017-07-26 16:02:01
插入拷贝数越多，基因的表达强度越高，得到的表型当然越明显。如果你做的互补突变T1没有表型，做个定量先检测一下基因的转录水平，排除基因没有表达的问题。如果基因的表达没有问题，那就要考虑其他的因素了。...

非常感谢！想给你金币来着，然后说你这不是应助帖不能给金币

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6楼2017-07-27 11:11:05
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