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shiliyusly

新虫 (小有名气)

[求助] 拟南芥突变体互补试验 已有1人参与

大家好!关于拟南芥突变体互补试验,我有个困惑,期待大牛们能帮我解答下,大谢啊!
互补试验中,T1代抗性拟南芥到底能不能出现缺失的表型?
我找到的几篇SCI文章都是说T1代就出现了表型的,表型还相当的明显!
但是理论上花序侵染法中,农杆菌只侵染雌配子体,所以所有的T1代苗都是杂合子Aa,但表型应该不会很明显啊?并且我实验得到的T1代也都没有表型。
请问,T1代抗性植株可能出现明显的表型吗?什么情况出现?几率大吗?
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-07-27 07:47:43
取决于转入的拷贝数以及启动子的强度。如果用35S强启动子,基本上都会有表型出现,除非你插入的基因序列出了问题,如果是基因本身的启动子,强度太低,插入的拷贝数也低的话,有可能不会出现明显的表型。

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2楼2017-07-26 15:14:11
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shiliyusly

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2017-07-26 15:14:11
取决于转入的拷贝数以及启动子的强度。如果用35S强启动子,基本上都会有表型出现,除非你插入的基因序列出了问题,如果是基因本身的启动子,强度太低,插入的拷贝数也低的话,有可能不会出现明显的表型。

谢谢你!你说的拷贝数,是指单拷贝,多拷贝插入吗?只有单拷贝插入才有性状分离。你的意思是多拷贝插入会出现明显性状吗?关于多拷贝插入这块我不是很懂

发自小木虫IOS客户端
3楼2017-07-26 15:46:16
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-27 07:48:00
引用回帖:
3楼: Originally posted by shiliyusly at 2017-07-26 15:46:16
谢谢你!你说的拷贝数,是指单拷贝,多拷贝插入吗?只有单拷贝插入才有性状分离。你的意思是多拷贝插入会出现明显性状吗?关于多拷贝插入这块我不是很懂
...

插入拷贝数越多,基因的表达强度越高,得到的表型当然越明显。如果你做的互补突变T1没有表型,做个定量先检测一下基因的转录水平,排除基因没有表达的问题。如果基因的表达没有问题,那就要考虑其他的因素了。
4楼2017-07-26 16:02:01
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
shiliyusly: 金币+8, ★★★★★最佳答案 2017-07-26 19:32:32
shiliyusly: 金币+6, ★★★★★最佳答案 2017-07-26 19:36:06
你要互补的基因突变是否只在纯合的情况下才能观察到表型, 如果答案为”是“, 那么理论上T1代转基因植物应该观察到表型互补的。当然,各个T1植物之间转基因的插入位点是随机的 , 表达量也会有差异, 出现一些个体没有表型很正常。但是, 如果你观察了大于30株左右T1都没有看到预期的表型, 我认为最有可能出现下列情况:
1) 先确定转基因植物不是其它植株污染(你使用的转基因构件确确实实在T1植物体内)
2) 构件的启动子不正确,没有在正确的细胞里面表达
3) 引起表型的突变和你研究的基因无关
5楼2017-07-26 18:18:33
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shiliyusly

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2017-07-26 16:02:01
插入拷贝数越多,基因的表达强度越高,得到的表型当然越明显。如果你做的互补突变T1没有表型,做个定量先检测一下基因的转录水平,排除基因没有表达的问题。如果基因的表达没有问题,那就要考虑其他的因素了。...

非常感谢!想给你金币来着,然后说你这不是应助帖不能给金币

发自小木虫IOS客户端
6楼2017-07-27 11:11:05
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