| 查看: 2945 | 回复: 37 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
badronger新虫 (初入文坛)
|
[求助]
利用Crispr技术敲除链霉菌种属的基因 已有3人参与
|
|
|
利用Crispr技术敲除链霉菌种属的基因，但在第一步就花了两个月都没做出来，急！！！ 我是直接用的别人构建好的质粒，这个质粒上原本就是20nt，我得要把这20nt置换下来，连接上我自己的20nt，我是用酶切的方式（此质粒文献中的方法），但是这个酶是BaeI酶，这个酶比较特殊而且酶切效率不是很高。目前遇到的最大问题是，我的负对照（酶切后的质粒做连接转化，没有我的20nt）和我的实i验组长出的板子单克隆很奇怪，是那种像针尖一样，硬的，透明的很小的单克隆，很难挑。但是也能摇出菌，可是经测序是原始质粒。 我目前最大困惑： （1）就是为什么负对照和实验组（有我自己设计的20nt）长出的单克隆形态与原始质粒的单克隆（正常的大杆菌单克隆形态）非常不一致。 （2）虽说有可能是酶切效率不高，导致挑了很多单克隆都不是。但是我没切时间有8小时，我感觉足够长了，是不是BaeI这个酶太特别了 希望大神能帮忙一下，快三个了，没一点进展，老师逼得急啊  |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有150人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
5楼2017-07-25 10:31:10
kangaroo0513
新虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 154 (高中生)
- 金币: 2277.4
- 散金: 100
- 红花: 29
- 帖子: 464
- 在线: 119.4小时
- 虫号: 2621902
- 注册: 2013-08-28
- 专业: 细胞物质运输
2楼2017-07-22 21:12:13
badronger
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 27.8
- 散金: 10
- 帖子: 10
- 在线: 9.5小时
- 虫号: 4416665
- 注册: 2016-02-19
- 专业: 病原细菌与放线菌生物学
3楼2017-07-24 14:59:18
kangaroo0513
新虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 154 (高中生)
- 金币: 2277.4
- 散金: 100
- 红花: 29
- 帖子: 464
- 在线: 119.4小时
- 虫号: 2621902
- 注册: 2013-08-28
- 专业: 细胞物质运输
4楼2017-07-24 20:14:47
