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badronger新虫 (初入文坛)
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利用Crispr技术敲除链霉菌种属的基因 已有3人参与
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利用Crispr技术敲除链霉菌种属的基因，但在第一步就花了两个月都没做出来，急！！！ 我是直接用的别人构建好的质粒，这个质粒上原本就是20nt，我得要把这20nt置换下来，连接上我自己的20nt，我是用酶切的方式（此质粒文献中的方法），但是这个酶是BaeI酶，这个酶比较特殊而且酶切效率不是很高。目前遇到的最大问题是，我的负对照（酶切后的质粒做连接转化，没有我的20nt）和我的实i验组长出的板子单克隆很奇怪，是那种像针尖一样，硬的，透明的很小的单克隆，很难挑。但是也能摇出菌，可是经测序是原始质粒。 我目前最大困惑： （1）就是为什么负对照和实验组（有我自己设计的20nt）长出的单克隆形态与原始质粒的单克隆（正常的大杆菌单克隆形态）非常不一致。 （2）虽说有可能是酶切效率不高，导致挑了很多单克隆都不是。但是我没切时间有8小时，我感觉足够长了，是不是BaeI这个酶太特别了 希望大神能帮忙一下，快三个了，没一点进展，老师逼得急啊  |
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badronger
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