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碧川新虫 (小有名气)
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测乙酰胆碱酯酶抑制活性 已有1人参与
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用国产96孔板测的，为什么阴性对照组的OD值比空白组还要小啊。难不成是误差？会不会太大了。 发自小木虫Android客户端 |
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晋鹏
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【答案】应助回帖
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硫代乙酰胆碱(ATch)在乙酰胆碱酯酶(AChE)作用下分解,生成硫代胆碱,硫代胆碱与显色剂二硫代二硝基苯甲酸（DTNB)迅速作用,生成在412 nm处有光吸收的黄色物质,在酶催化反应的稳态阶段其 OD 值即可代表起始反应速率。 方法： 2.65 mLPBS(pH 8.0),50μL 乙酰胆碱酯酶(0.85 U/mL) , 100 μL 15 mM DTNB 和样品溶液100μL加入试管，37 ℃预热 2 min，然后加入100 μL15 mM 硫代乙酰胆碱（起始浓度是0.5 mM），在 37 ℃ 保温 20 min 后立即加入1 mL 0.4％SDS 终止反应，将所得溶液立即在412nm下测量吸光值并根据下式计算抑制率： 抑制率(％)=[A对照-(A 样品-A 样品空白)]/A对照×100。 按照公式计算抑制率，以横坐标为酶促反应体系中抑制剂的浓度，纵坐标为抑制率，绘制曲线，计算其抑制率为50%时的抑制剂浓度，即为IC50。 |
2楼2017-07-17 23:59:51
3楼2017-08-06 10:43:32
碧川
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我是根据文献做的，140μL0.1M PB＋20μL待测样品DMSO溶液＋20μL0.09u/ml酶溶液 混合 25℃孵化15min 再加10μL14mM ATCl 与10μL 14mM DTNB 10min后 410nm测OD值 毒扁豆碱作为阳性对照 发自小木虫Android客户端 |
4楼2017-08-09 09:53:05
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5楼2017-08-09 09:53:54
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9楼2017-08-09 21:06:08
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