24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 943  |  回复: 3
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

老猫飞上天

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组质粒做出来杂带多 已有1人参与

我的目标条带在2000bp左右。第一张图是菌液pcr,体系20ul,酶10 上下引物各1 菌液1ul,p出来很多杂带,目标条带有但是很弱。通过筛选,将可疑的选出来提质粒。第二张图是把菌液中的质粒提出来之后pcr,体系20ul 酶10 上下引物各1 质粒0.2,但是p出来效果跟菌液pcr效果一样。引物应该没有问题,我现在准备将质粒酶切再跑一次看看,请问我的问题出在哪里,求大神指点

重组质粒做出来杂带多


重组质粒做出来杂带多-1


发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

老猫飞上天

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-07-18 00:57:51
PCR应该是没有工作,可能的原因很多:
1. 质粒不对
2. 引物不特异,或有多个结合位点
3. PCR程序有问题
。。。。

谢谢指教。但是我的模板和质粒都是相同内切酶切的,引物,酶,体系和程序都跟前面p模板的一样。如果是引物特异性不好,该怎么验证呢

发自小木虫Android客户端
3楼2017-07-20 09:32:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

zhouxfd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR应该是没有工作,可能的原因很多:
1. 质粒不对
2. 引物不特异,或有多个结合位点
3. PCR程序有问题
。。。。
2楼2017-07-18 00:57:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxfd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

关键是你的质粒序列可不可靠,如果有全序列的话选两个酶切一下试试
4楼2017-07-21 00:21:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600,321分求调剂 +4 大馋小子 2026-03-31 4/200 2026-03-31 14:53 by 六翼TMR
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分 +13 辰沐5211314 2026-03-26 13/650 2026-03-31 14:37 by 记事本2026
[考研] 一志愿中海洋材料357 +4 麦恩莉. 2026-03-30 4/200 2026-03-31 14:35 by 记事本2026
[考研] 一志愿211,335分,0856,求调剂院校和导师 +10 倾____萧 2026-03-27 11/550 2026-03-31 14:32 by fmesaito
[考研] 322求调剂 +10 旧吢 2026-03-24 10/500 2026-03-31 13:31 by 无际的草原
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +6 hanamiko 2026-03-30 6/300 2026-03-31 12:19 by 唐沐儿
[考研] 085600,专业课化工原理,320分求调剂 +6 大馋小子 2026-03-29 6/300 2026-03-31 10:03 by 氯化亚硝酰
[考研] 083000学硕274求调剂 +12 Li李鱼 2026-03-26 12/600 2026-03-31 10:01 by cal0306
[考研] 看看我!301求调剂 081700 +3 一个小明同学 2026-03-24 3/150 2026-03-31 09:40 by longlotian
[考研] 085601一志愿西北工业大学初试346 +4 085601初试346 2026-03-30 4/200 2026-03-31 07:47 by jp9609
[考研] 083000环境科学与工程调剂,总分281 +4 橙子(胜意) 2026-03-30 4/200 2026-03-31 00:44 by Linzejun
[考研] 一志愿:西北大学,英一数一408-284分求调剂 +5 12.27 2026-03-27 5/250 2026-03-30 19:31 by 源_2020
[考研] 一志愿厦门大学材料工程专硕354找调剂!!! +5 贝呗钡钡 2026-03-30 5/250 2026-03-30 18:16 by 无际的草原
[考研] 071010 323 分求调剂 +3 Baekzhy 2026-03-27 3/150 2026-03-30 14:24 by andresqi
[考研] 0703本科郑州大学求调剂 +7 nhj_ 2026-03-25 7/350 2026-03-30 12:44 by fangnagu
[考研] 327求调剂 +6 汲亦昊 2026-03-29 6/300 2026-03-29 13:40 by peike
[考研] 298求调剂 +4 种圣赐 2026-03-28 4/200 2026-03-29 08:42 by q1092522407
[考研] 352分 化工与材料 +5 海纳百川Ly 2026-03-27 5/250 2026-03-28 03:39 by fmesaito
[考研] 化学调剂 +4 爱吃番茄的旭 2026-03-24 5/250 2026-03-27 17:50 by kiokin
[考研] 中国科学院深圳先进技术研究院-光纤传感课题组招生-中国科学院大学、深圳理工大学联培 +5 YangTyu1 2026-03-26 5/250 2026-03-26 18:27 by 猫咪猫咪呀
信息提示
请填处理意见