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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组质粒做出来杂带多
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老猫飞上天

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组质粒做出来杂带多 已有1人参与

我的目标条带在2000bp左右。第一张图是菌液pcr，体系20ul,酶10 上下引物各1 菌液1ul，p出来很多杂带，目标条带有但是很弱。通过筛选，将可疑的选出来提质粒。第二张图是把菌液中的质粒提出来之后pcr，体系20ul 酶10 上下引物各1 质粒0.2，但是p出来效果跟菌液pcr效果一样。引物应该没有问题，我现在准备将质粒酶切再跑一次看看，请问我的问题出在哪里，求大神指点

重组质粒做出来杂带多


重组质粒做出来杂带多-1


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1楼 2017-07-17 16:40:47
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR应该是没有工作，可能的原因很多：
1. 质粒不对
2. 引物不特异，或有多个结合位点
3. PCR程序有问题
。。。。
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2楼2017-07-18 00:57:51
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老猫飞上天

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-07-18 00:57:51
PCR应该是没有工作，可能的原因很多：
1. 质粒不对
2. 引物不特异，或有多个结合位点
3. PCR程序有问题
。。。。

谢谢指教。但是我的模板和质粒都是相同内切酶切的，引物，酶，体系和程序都跟前面p模板的一样。如果是引物特异性不好，该怎么验证呢

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3楼2017-07-20 09:32:14
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

关键是你的质粒序列可不可靠，如果有全序列的话选两个酶切一下试试
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4楼2017-07-21 00:21:16
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