24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 940  |  回复: 3

老猫飞上天

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组质粒做出来杂带多 已有1人参与

我的目标条带在2000bp左右。第一张图是菌液pcr,体系20ul,酶10 上下引物各1 菌液1ul,p出来很多杂带,目标条带有但是很弱。通过筛选,将可疑的选出来提质粒。第二张图是把菌液中的质粒提出来之后pcr,体系20ul 酶10 上下引物各1 质粒0.2,但是p出来效果跟菌液pcr效果一样。引物应该没有问题,我现在准备将质粒酶切再跑一次看看,请问我的问题出在哪里,求大神指点

重组质粒做出来杂带多


重组质粒做出来杂带多-1


发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxfd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR应该是没有工作,可能的原因很多:
1. 质粒不对
2. 引物不特异,或有多个结合位点
3. PCR程序有问题
。。。。
2楼2017-07-18 00:57:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

老猫飞上天

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-07-18 00:57:51
PCR应该是没有工作,可能的原因很多:
1. 质粒不对
2. 引物不特异,或有多个结合位点
3. PCR程序有问题
。。。。

谢谢指教。但是我的模板和质粒都是相同内切酶切的,引物,酶,体系和程序都跟前面p模板的一样。如果是引物特异性不好,该怎么验证呢

发自小木虫Android客户端
3楼2017-07-20 09:32:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxfd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

关键是你的质粒序列可不可靠,如果有全序列的话选两个酶切一下试试
4楼2017-07-21 00:21:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 老猫飞上天 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 270求调剂 +3 小杰pp 2026-03-31 4/200 2026-03-31 12:59 by wxiongid
[考研] 294分080500材料科学与工程求调剂 +9 柳溪边 2026-03-26 9/450 2026-03-31 12:16 by oooqiao
[考研] 本科211生物医学工程085409求调剂339分 +5 里子木yy 2026-03-29 5/250 2026-03-31 10:44 by WWM123
[考研] 085601 329分调剂 +4 yzsa12 2026-03-31 4/200 2026-03-31 08:11 by jp9609
[考研] 085601一志愿中山大学深圳材料工程330求调剂 +5 pipiver 2026-03-30 5/250 2026-03-31 07:37 by JourneyLucky
[考研] 调剂 +4 GK72 2026-03-30 4/200 2026-03-30 20:32 by dick_runner
[考研] 279求调剂 +12 j的立方 2026-03-29 12/600 2026-03-30 20:30 by dick_runner
[考研] 322求调剂 +10 宋明欣 2026-03-27 10/500 2026-03-30 18:47 by 544594351
[考研] 293求调剂 +3 末未mm 2026-03-30 5/250 2026-03-30 17:23 by 王保杰33
[考研] 化学0703 调剂 306分 一志愿211 +8 26要上岸 2026-03-28 8/400 2026-03-30 16:39 by herarysara
[考研] 环境科学与工程334分求调剂 +6 王一一依依 2026-03-30 8/400 2026-03-30 11:52 by yjolah
[考研] 求调剂 +10 张zz111 2026-03-27 11/550 2026-03-30 09:17 by 无际的草原
[考研] 求调剂 +4 QiMing7 2026-03-25 5/250 2026-03-29 21:10 by 唐沐儿
[考研] 352分 化工与材料 +5 海纳百川Ly 2026-03-27 5/250 2026-03-28 03:39 by fmesaito
[考研] 一志愿上海理工能源动力(085800)310分求调剂 +3 zhangmingc 2026-03-27 4/200 2026-03-27 19:01 by 给你你注意休息
[考研] 314求调剂 +3 溪云珂 2026-03-26 3/150 2026-03-27 11:20 by sanrepian
[考研] 324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-26 5/250 2026-03-27 10:33 by wangjy2002
[考研] 求调剂 +6 林之夕 2026-03-24 6/300 2026-03-27 08:38 by hypershenger
[考研] 347求调剂 +4 L when 2026-03-25 4/200 2026-03-25 13:37 by cocolv
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
信息提示
请填处理意见