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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » DNA能跑出但PCR却什么都没有
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adjoq

新虫 (初入文坛)

[求助] DNA能跑出但PCR却什么都没有 已有2人参与

我们做植物的DNA提取，跑出来的带大都是好的，但为什么PCR却一条带都没有，只有少许隐约的痕迹，能确定程序和试剂没问题，不知道什么原因，已经试了很多遍了，还是什么都没有。导师说这是运气问题，但我不相信，你们能告诉我在提取DNA和PCR需要注意些什么吗?造成这种结果是什么原因？谢谢

DNA能跑出但PCR却什么都没有


DNA能跑出但PCR却什么都没有-1


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1楼 2017-07-16 23:36:02
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

chunlongyang

木虫 (著名写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-17 07:39:29
模板量减少，50ul体系加小于100ngDNA。另外，你的DNA中RNA量太多了，加RNA酶处理一下。

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要是能有一点点社会贡献就知足了。
2楼2017-07-16 23:44:04
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伤何处

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-07-17 07:39:41
同意楼上说的。你的DNA含有RNA太多，需要加RNA酶处理，去除RNA，然后再测下DNA浓度。因为有RNA的存在，你之前测得DNA浓度会偏高好多。一般50微升体系DNA50-100ng就够了。  还有就是你用DNA是为了扩启动子？ 如果基因组测序了，那么根据基因组设计的引物一般都没问题。但是如果是根据相似种的基因组设计引物的话，往往会扩增不出来，因为启动子不像CDS那样保守，所以这时候确实是比较碰运气的。
祝好
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对也罢，错也罢；正也罢，逆也罢；通途也好，崎岖无妨……但问，吾心坚否？若坚，纵使歧路，以铁心，贯穿而过，亦为大道！不坚，便是坦途，也难登临绝顶，观险峰
3楼2017-07-17 00:21:35
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wenhuoyeying

新虫 (正式写手)
我能看到的事，你导师是个开明的老师，

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8楼2017-07-17 22:26:17
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普通回帖

adjoq

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chunlongyang at 2017-07-16 23:44:04
模板量减少，50ul体系加小于100ngDNA。另外，你的DNA中RNA量太多了，加RNA酶处理一下。

嗯，好的，我试试，谢谢

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4楼2017-07-17 08:42:28
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adjoq

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 伤何处 at 2017-07-17 00:21:35
同意楼上说的。你的DNA含有RNA太多，需要加RNA酶处理，去除RNA，然后再测下DNA浓度。因为有RNA的存在，你之前测得DNA浓度会偏高好多。一般50微升体系DNA50-100ng就够了。  还有就是你用DNA是为了扩启动子？ 如果基因 ...

我好像属于第二种，是先跑PCR，再测序

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5楼2017-07-17 08:46:05
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marylucksu

新虫 (正式写手)
露珠做出来了吗，我也遇到类似情况

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6楼2017-07-17 14:31:12
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adjoq

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by marylucksu at 2017-07-17 14:31:12
露珠做出来了吗，我也遇到类似情况

露珠是什么啊

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7楼2017-07-17 17:14:56
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初入江湖猪猪

新虫 (正式写手)
你提的DNA很明显不纯

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9楼2017-07-17 23:27:42
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adjoq

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 初入江湖猪猪 at 2017-07-17 23:27:42
你提的DNA很明显不纯

是拖带的问题吗？

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10楼2017-07-17 23:42:32
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