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adjoq

新虫 (初入文坛)

[求助] DNA能跑出但PCR却什么都没有 已有2人参与

我们做植物的DNA提取,跑出来的带大都是好的,但为什么PCR却一条带都没有,只有少许隐约的痕迹,能确定程序和试剂没问题,不知道什么原因,已经试了很多遍了,还是什么都没有。导师说这是运气问题,但我不相信,你们能告诉我在提取DNA和PCR需要注意些什么吗?造成这种结果是什么原因?谢谢

DNA能跑出但PCR却什么都没有


DNA能跑出但PCR却什么都没有-1


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chunlongyang

木虫 (著名写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-17 07:39:29
模板量减少,50ul体系加小于100ngDNA。另外,你的DNA中RNA量太多了,加RNA酶处理一下。

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要是能有一点点社会贡献就知足了。
2楼2017-07-16 23:44:04
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伤何处

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-07-17 07:39:41
同意楼上说的。你的DNA含有RNA太多,需要加RNA酶处理,去除RNA,然后再测下DNA浓度。因为有RNA的存在,你之前测得DNA浓度会偏高好多。一般50微升体系DNA50-100ng就够了。  还有就是你用DNA是为了扩启动子? 如果基因组测序了,那么根据基因组设计的引物一般都没问题。但是如果是根据相似种的基因组设计引物的话,往往会扩增不出来,因为启动子不像CDS那样保守,所以这时候确实是比较碰运气的。
祝好
对也罢,错也罢;正也罢,逆也罢;通途也好,崎岖无妨……但问,吾心坚否?若坚,纵使歧路,以铁心,贯穿而过,亦为大道!不坚,便是坦途,也难登临绝顶,观险峰
3楼2017-07-17 00:21:35
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wenhuoyeying

新虫 (正式写手)

我能看到的事,你导师是个开明的老师,

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8楼2017-07-17 22:26:17
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adjoq

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chunlongyang at 2017-07-16 23:44:04
模板量减少,50ul体系加小于100ngDNA。另外,你的DNA中RNA量太多了,加RNA酶处理一下。

嗯,好的,我试试,谢谢

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4楼2017-07-17 08:42:28
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adjoq

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 伤何处 at 2017-07-17 00:21:35
同意楼上说的。你的DNA含有RNA太多,需要加RNA酶处理,去除RNA,然后再测下DNA浓度。因为有RNA的存在,你之前测得DNA浓度会偏高好多。一般50微升体系DNA50-100ng就够了。  还有就是你用DNA是为了扩启动子? 如果基因 ...

我好像属于第二种,是先跑PCR,再测序

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5楼2017-07-17 08:46:05
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marylucksu

新虫 (正式写手)

露珠做出来了吗,我也遇到类似情况

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6楼2017-07-17 14:31:12
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adjoq

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by marylucksu at 2017-07-17 14:31:12
露珠做出来了吗,我也遇到类似情况

露珠是什么啊

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7楼2017-07-17 17:14:56
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初入江湖猪猪

新虫 (正式写手)

9楼2017-07-17 23:27:42
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adjoq

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 初入江湖猪猪 at 2017-07-17 23:27:42
你提的DNA很明显不纯

是拖带的问题吗?

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10楼2017-07-17 23:42:32
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