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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 老师您好，我做DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳条带模糊，很宽。看网上...
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齐齐齐姑娘

新虫 (小有名气)

[求助] 老师您好，我做DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳条带模糊，很宽。看网上... 已有3人参与

老师您好，我做DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳条带模糊，很宽。看网上说的可能是由于盐的浓度过高，用乙醇沉淀除去过多的盐。我想请教的是具体操作是什么。做电泳前我的样是12微升，用PBS缓冲液稀释的DNA样，里面含NaCl, MgCl2。如何用乙醇除去啊，或者老师有没有更好的方法，谢谢了！ @biostar2009

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1楼 2017-07-14 16:16:15
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

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2楼2017-07-14 17:16:43
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 齐齐齐姑娘 at 2017-07-16 15:37:11
在生工合成的自己设计的DNA链，先加水稀释至10-4次方，做电泳的时候用10mMPBS缓冲液(0.3M NaCl, 5mM MgCl2) 稀释至10-5次方。
...

我不太懂你在干什么

首先你胶上没有marker，而且看上去，没有一条lane的条带可以算上“不错”

然后我不知道10^-4和10^-5是个什么意思？生工给你的是干粉吧？起始浓度是什么？

最后，仍然是，你做这件事，是想回答个神马问题？
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11楼2017-08-07 13:18:53
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sweetcoffei

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-16 23:20:05
引用回帖:
4楼: Originally posted by 齐齐齐姑娘 at 2017-07-14 17:30:08
因为必须要用PBS缓冲液稀释，但是盐的浓度又太高，电泳总跑不好。同学们做电泳用的缓冲液是TE，条带很清晰。
...

如果您没有做过DNA提取、纯化，可以这样进行：计算样品NaCl浓度，使其达到0.5M后，加入2倍体积的无水乙醇，-20 C沉淀半小时以上，10000rpm，10min，干燥，水溶解，电泳。希望对你有用！
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7楼2017-07-15 07:52:39
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齐齐齐姑娘

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biostar2009 at 2017-07-14 17:16:43
结果长啥样？
结果长啥样？
结果长啥样？

如图所示，前几个条带跑的一点都不好，谢谢老师
老师您好，我做DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳条带模糊，很宽。看网上...



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3楼2017-07-14 17:28:01
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齐齐齐姑娘

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biostar2009 at 2017-07-14 17:16:43
结果长啥样？
结果长啥样？
结果长啥样？

因为必须要用PBS缓冲液稀释，但是盐的浓度又太高，电泳总跑不好。同学们做电泳用的缓冲液是TE，条带很清晰。

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4楼2017-07-14 17:30:08
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

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你的样品里是不是有蛋白
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5楼2017-07-15 02:54:07
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齐齐齐姑娘

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-07-15 02:54:07
你的样品里是不是有蛋白

没有蛋白，只有单纯的DNA链

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6楼2017-07-15 07:29:51
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 齐齐齐姑娘 at 2017-07-15 07:29:51
没有蛋白，只有单纯的DNA链
...

请具体说明你的样品是什么样品

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8楼2017-07-16 00:05:27
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齐齐齐姑娘

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-07-16 00:05:27
请具体说明你的样品是什么样品
...

在生工合成的自己设计的DNA链，先加水稀释至10-4次方，做电泳的时候用10mMPBS缓冲液(0.3M NaCl, 5mM MgCl2) 稀释至10-5次方。

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9楼2017-07-16 15:37:11
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 齐齐齐姑娘 at 2017-07-16 15:37:11
在生工合成的自己设计的DNA链，先加水稀释至10-4次方，做电泳的时候用10mMPBS缓冲液(0.3M NaCl, 5mM MgCl2) 稀释至10-5次方。
...

如果是合成的引物不需要电泳检测吧，直接PCR就行

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10楼2017-07-17 00:15:07
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