24小时热门版块排行榜    

查看: 1637  |  回复: 10

好不靠谱

新虫 (初入文坛)

[交流] 链霉菌PCR 已有5人参与

我有三个链霉菌的基因片段需要从基因组中克隆出来,可是GC含量很高,设计了引物,但是觉得引物很难弄,用梯度PCR以及touchdown都做了很多次,改过温度,酶,但是还是很难P出目的条带

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ladejueshi

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我建议你在反应体系里加点DMSO

发自小木虫IOS客户端
9楼2017-06-30 20:34:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinhx87

至尊木虫 (知名作家)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-30 22:58:18
2个关键点:1、DNA聚合酶;2、能否变性。是哪个地方的?
2楼2017-06-30 08:53:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dahai1984

铁虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-30 22:58:35
需要设计特异引物,整个体系是否正确,降低对火温度试试看

发自小木虫Android客户端
4楼2017-06-30 09:52:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinhx87

至尊木虫 (知名作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
因GC含量高,不易变性,从而导致PCR失败。
7楼2017-06-30 12:43:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

whdxhxy

木虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-30 22:58:50
做过几年链霉菌,首先,以gDNA为模板的话首先要保证模板质量高,其次,你的引物质量问题,最后,不知道你的PCR体系是什么样的,建议加入6%体积的DMSO。
8楼2017-06-30 14:45:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

mayunhui

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
直接从基因组中克隆基因吗?应该不太可能吧。
书到用时方恨少
3楼2017-06-30 09:26:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

好不靠谱

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jinhx87 at 2017-06-30 08:53:13
2个关键点:1、DNA聚合酶;2、能否变性。是哪个地方的?

你好,第二点我不太明白

发自小木虫IOS客户端
5楼2017-06-30 10:37:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

好不靠谱

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by dahai1984 at 2017-06-30 09:52:21
需要设计特异引物,整个体系是否正确,降低对火温度试试看

降低退火温度后,偶尔能P出条带,但是非特异性条带很多,大小吻合的条带去测序后与目的条带并不吻合

发自小木虫IOS客户端
6楼2017-06-30 10:38:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

好不靠谱

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by jinhx87 at 2017-06-30 12:43:33
因GC含量高,不易变性,从而导致PCR失败。

我有预变性

发自小木虫IOS客户端
10楼2017-07-04 15:54:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 好不靠谱 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见