24小时热门版块排行榜    

查看: 1841  |  回复: 10

好不靠谱

新虫 (初入文坛)

[交流] 链霉菌PCR 已有5人参与

我有三个链霉菌的基因片段需要从基因组中克隆出来,可是GC含量很高,设计了引物,但是觉得引物很难弄,用梯度PCR以及touchdown都做了很多次,改过温度,酶,但是还是很难P出目的条带

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ladejueshi

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我建议你在反应体系里加点DMSO

发自小木虫IOS客户端
9楼2017-06-30 20:34:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinhx87

至尊木虫 (知名作家)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-30 22:58:18
2个关键点:1、DNA聚合酶;2、能否变性。是哪个地方的?
2楼2017-06-30 08:53:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dahai1984

铁虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-30 22:58:35
需要设计特异引物,整个体系是否正确,降低对火温度试试看

发自小木虫Android客户端
4楼2017-06-30 09:52:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinhx87

至尊木虫 (知名作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
因GC含量高,不易变性,从而导致PCR失败。
7楼2017-06-30 12:43:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

whdxhxy

木虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-30 22:58:50
做过几年链霉菌,首先,以gDNA为模板的话首先要保证模板质量高,其次,你的引物质量问题,最后,不知道你的PCR体系是什么样的,建议加入6%体积的DMSO。
8楼2017-06-30 14:45:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

mayunhui

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
直接从基因组中克隆基因吗?应该不太可能吧。
书到用时方恨少
3楼2017-06-30 09:26:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

好不靠谱

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jinhx87 at 2017-06-30 08:53:13
2个关键点:1、DNA聚合酶;2、能否变性。是哪个地方的?

你好,第二点我不太明白

发自小木虫IOS客户端
5楼2017-06-30 10:37:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

好不靠谱

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by dahai1984 at 2017-06-30 09:52:21
需要设计特异引物,整个体系是否正确,降低对火温度试试看

降低退火温度后,偶尔能P出条带,但是非特异性条带很多,大小吻合的条带去测序后与目的条带并不吻合

发自小木虫IOS客户端
6楼2017-06-30 10:38:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

好不靠谱

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by jinhx87 at 2017-06-30 12:43:33
因GC含量高,不易变性,从而导致PCR失败。

我有预变性

发自小木虫IOS客户端
10楼2017-07-04 15:54:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 好不靠谱 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国自然评审意见 +8 wangmingqi 2026-08-28 9/450 2026-08-28 20:57 by Tide man
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +11 Kittylucky 2026-08-27 12/600 2026-08-28 16:26 by lyxiaomc
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +3 德尚中行 2026-08-27 3/150 2026-08-28 15:24 by rongshuxia
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
信息提示
请填处理意见