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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 用普通的TAQ酶可以扩增出基因条带，用高保真酶扩增不出来了该怎么办呢
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ziying12590

铜虫 (小有名气)

[求助] 用普通的TAQ酶可以扩增出基因条带，用高保真酶扩增不出来了该怎么办呢 已有1人参与

用普通的TAQ酶可以扩增出基因条带，用高保真酶扩增不出来了，延长退火时间会出现很弱的目的条带，但非特异扩增严重。请问下大神这种情况该怎么办呢
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1楼 2017-06-29 15:22:48
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bio转录组

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-29 22:45:56
没办法，直接用普通酶做，你应该是用来测序的吧，多测一下就行了。
或者你改变一下退火温度，跑一个touchdow PCR试一下
赞一下(2人) 回复此楼
生活活生生累死
2楼2017-06-29 20:05:49
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王查查23

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
3楼2017-06-29 21:00:35
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ziying12590

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bio转录组 at 2017-06-29 20:05:49
没办法，直接用普通酶做，你应该是用来测序的吧，多测一下就行了。
或者你改变一下退火温度，跑一个touchdow PCR试一下

跑了个降落，居然不同公司的酶跑出来情况不一样，有一个公司的酶跑出来了，但条带很弱，怎么改进呢

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4楼2017-07-01 08:15:09
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598878157

版主 (文学泰斗)

rky
哈哈

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5楼2017-07-01 08:32:28
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bio转录组

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ziying12590 at 2017-07-01 08:15:09
跑了个降落，居然不同公司的酶跑出来情况不一样，有一个公司的酶跑出来了，但条带很弱，怎么改进呢
...

感觉应该是引物设计的问题1重新设计一对引物试试，还有一个方法，用第一轮pcr产物当做模板，稀释10倍，跑pcr试试

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生活活生生累死
6楼2017-07-01 14:14:45
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hzau103

新虫 (正式写手)
再换几个公司的试试 可以问不同牌子的要试用装

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7楼2017-07-01 15:30:11
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liuhang91

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
8楼2017-10-21 13:12:52
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