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ziying12590

铜虫 (小有名气)

[求助] 用普通的TAQ酶可以扩增出基因条带,用高保真酶扩增不出来了该怎么办呢 已有1人参与

用普通的TAQ酶可以扩增出基因条带,用高保真酶扩增不出来了,延长退火时间会出现很弱的目的条带,但非特异扩增严重。请问下大神这种情况该怎么办呢
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bio转录组

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-29 22:45:56
没办法,直接用普通酶做,你应该是用来测序的吧,多测一下就行了。
或者你改变一下退火温度,跑一个touchdow PCR试一下
生活活生生累死
2楼2017-06-29 20:05:49
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王查查23

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

3楼2017-06-29 21:00:35
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ziying12590

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bio转录组 at 2017-06-29 20:05:49
没办法,直接用普通酶做,你应该是用来测序的吧,多测一下就行了。
或者你改变一下退火温度,跑一个touchdow PCR试一下

跑了个降落,居然不同公司的酶跑出来情况不一样,有一个公司的酶跑出来了,但条带很弱,怎么改进呢

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4楼2017-07-01 08:15:09
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598878157

版主 (文学泰斗)

rky

5楼2017-07-01 08:32:28
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bio转录组

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ziying12590 at 2017-07-01 08:15:09
跑了个降落,居然不同公司的酶跑出来情况不一样,有一个公司的酶跑出来了,但条带很弱,怎么改进呢
...

感觉应该是引物设计的问题1重新设计一对引物试试,还有一个方法,用第一轮pcr产物当做模板,稀释10倍,跑pcr试试

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生活活生生累死
6楼2017-07-01 14:14:45
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hzau103

新虫 (正式写手)

再换几个公司的试试 可以问不同牌子的要试用装

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7楼2017-07-01 15:30:11
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liuhang91

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

8楼2017-10-21 13:12:52
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