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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 霍乱弧菌的特异性基因扩增（lolB?)
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粥-小菜

新虫 (初入文坛)

[求助] 霍乱弧菌的特异性基因扩增（lolB?)

现在在做水产品中霍乱弧菌的分离鉴定，方法是先用PBS制作菌悬液，再涂布到TCBS琼脂培养基上，培养12-18h,挑取黄色可疑单菌落至TSB液体培养基上，14h左右，再吸取菌液热裂解作为DNA模板扩增特异性基因lolB，每次都挑取150个左右来做，但是只有1,2个，而且条带很弱。现在怀疑是不是扩增的目的基因不是这个lolB基因。还是其他地方错了，导致检出率这么低。新手，希望知道的大神们可以给予指点，谢谢！
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无所畏惧，春暖花开
1楼 2017-06-25 21:44:02
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许彦

木虫 (正式写手)
条带大小一样吗，

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2楼2017-06-28 07:07:40
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粥-小菜

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 许彦 at 2017-06-28 07:07:40
条带大小一样吗，

一样的，都在519bp
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无所畏惧，春暖花开
3楼2017-07-04 10:58:05
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许彦

木虫 (正式写手)
你本身这对引物要求的片段大小是多少，还有你们可以选择商品化试剂盒吗？

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4楼2017-07-04 11:19:40
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粥-小菜

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 许彦 at 2017-07-04 11:19:40
你本身这对引物要求的片段大小是多少，还有你们可以选择商品化试剂盒吗？

要求的片段大小是519bp，选用的是100bp的Marker,几个扩出来的在500bp附近，不确定到底是不是519bp.然后之后我就一直用第一次筛出来的一株的DNA来做阳性对照
在初筛阶段，试剂盒导师好像不给用，太浪费了
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无所畏惧，春暖花开
5楼2017-07-04 12:33:16
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许彦

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 粥-小菜 at 2017-07-04 12:33:16
要求的片段大小是519bp，选用的是100bp的Marker,几个扩出来的在500bp附近，不确定到底是不是519bp.然后之后我就一直用第一次筛出来的一株的DNA来做阳性对照
在初筛阶段，试剂盒导师好像不给用，太浪费了...

可以把有条带的测序看看

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6楼2017-07-05 05:31:53
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