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霍乱弧菌的特异性基因扩增(lolB?)
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霍乱弧菌的特异性基因扩增(lolB?)
现在在做水产品中霍乱弧菌的分离鉴定,方法是先用PBS制作菌悬液,再涂布到TCBS琼脂培养基上,培养12-18h,挑取黄色可疑单菌落至TSB液体培养基上,14h左右,再吸取菌液热裂解作为DNA模板扩增特异性基因lolB,每次都挑取150个左右来做,但是只有1,2个,而且条带很弱。现在怀疑是不是扩增的目的基因不是这个lolB基因。还是其他地方错了,导致检出率这么低。新手,希望知道的大神们可以给予指点,谢谢!
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无所畏惧,春暖花开
1楼
2017-06-25 21:44:02
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许彦
at 2017-06-28 07:07:40
条带大小一样吗,
一样的,都在519bp
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无所畏惧,春暖花开
3楼
2017-07-04 10:58:05
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条带大小一样吗,
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2楼
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你本身这对引物要求的片段大小是多少,还有你们可以选择商品化试剂盒吗?
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4楼
2017-07-04 11:19:40
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4楼
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许彦
at 2017-07-04 11:19:40
你本身这对引物要求的片段大小是多少,还有你们可以选择商品化试剂盒吗?
要求的片段大小是519bp,选用的是100bp的Marker,几个扩出来的在500bp附近,不确定到底是不是519bp.然后之后我就一直用第一次筛出来的一株的DNA来做阳性对照
在初筛阶段,试剂盒导师好像不给用,太浪费了
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无所畏惧,春暖花开
5楼
2017-07-04 12:33:16
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