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[求助]
为何小样诱导有条带，大量诱导后目的条带几乎没了？ 已有1人参与
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如图1是预诱导时的图，使用的载体是PET-32a，目的蛋白大小约66.2kDa。小样预诱导时，由于实验室内的小型超声波破碎仪坏了，跑的胶是全菌（未破碎），条带显示有我的目的条带，小样诱导的条件是：先摇菌2.5h-3h后，加IPTG 16° 诱导20h。 然后再大量摇菌，每瓶300ml，IPTG浓度取0.3M，摇菌4h后，加IPTG 16°诱导20h后用大型低温高压破碎仪破碎，破碎后发现有白色的乳状物体？？（如图2）然后离心取上清液过镍柱，用不同浓度咪唑洗脱。 可是跑胶发现我的目的蛋白浓度很低，甚至不如杂蛋白浓度。尤其是第一个孔那里的上清液中的目的蛋白浓度很低，（如图3）求助大神，为何小样诱导时条带很亮，而大量诱导反而浓度低了？是我大量诱导的条件需要改变还是蛋白在沉淀中表达？如果在沉淀中表达的话，如何才能纯化出来呢？谢谢！！  1.蛋白小样预诱导（没破碎，跑的全菌）  2.蛋白大量破碎后有白色乳状沉淀  3.大量诱导后过柱图，上清液中目的蛋白量少 |
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