| 查看: 1499 | 回复: 5 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
为何小样诱导有条带，大量诱导后目的条带几乎没了？ 已有1人参与
|
||
|
如图1是预诱导时的图，使用的载体是PET-32a，目的蛋白大小约66.2kDa。小样预诱导时，由于实验室内的小型超声波破碎仪坏了，跑的胶是全菌（未破碎），条带显示有我的目的条带，小样诱导的条件是：先摇菌2.5h-3h后，加IPTG 16° 诱导20h。 然后再大量摇菌，每瓶300ml，IPTG浓度取0.3M，摇菌4h后，加IPTG 16°诱导20h后用大型低温高压破碎仪破碎，破碎后发现有白色的乳状物体？？（如图2）然后离心取上清液过镍柱，用不同浓度咪唑洗脱。 可是跑胶发现我的目的蛋白浓度很低，甚至不如杂蛋白浓度。尤其是第一个孔那里的上清液中的目的蛋白浓度很低，（如图3）求助大神，为何小样诱导时条带很亮，而大量诱导反而浓度低了？是我大量诱导的条件需要改变还是蛋白在沉淀中表达？如果在沉淀中表达的话，如何才能纯化出来呢？谢谢！！  1.蛋白小样预诱导（没破碎，跑的全菌）  2.蛋白大量破碎后有白色乳状沉淀  3.大量诱导后过柱图，上清液中目的蛋白量少 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有247人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
6楼2017-06-20 09:16:11
2楼2017-06-16 10:14:15
3楼2017-06-16 10:31:14
4楼2017-06-16 10:35:40
