应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 为何小样诱导有条带，大量诱导后目的条带几乎没了？
61/1返回列表
查看: 1494  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

我是一只老年

新虫 (初入文坛)

[求助] 为何小样诱导有条带，大量诱导后目的条带几乎没了？ 已有1人参与

如图1是预诱导时的图，使用的载体是PET-32a，目的蛋白大小约66.2kDa。小样预诱导时，由于实验室内的小型超声波破碎仪坏了，跑的胶是全菌（未破碎），条带显示有我的目的条带，小样诱导的条件是：先摇菌2.5h-3h后，加IPTG 16° 诱导20h。

然后再大量摇菌，每瓶300ml，IPTG浓度取0.3M，摇菌4h后，加IPTG 16°诱导20h后用大型低温高压破碎仪破碎，破碎后发现有白色的乳状物体？？（如图2）然后离心取上清液过镍柱，用不同浓度咪唑洗脱。

可是跑胶发现我的目的蛋白浓度很低，甚至不如杂蛋白浓度。尤其是第一个孔那里的上清液中的目的蛋白浓度很低，（如图3）求助大神，为何小样诱导时条带很亮，而大量诱导反而浓度低了？是我大量诱导的条件需要改变还是蛋白在沉淀中表达？如果在沉淀中表达的话，如何才能纯化出来呢？谢谢！！

为何小样诱导有条带，大量诱导后目的条带几乎没了？
1.蛋白小样预诱导（没破碎，跑的全菌）


为何小样诱导有条带，大量诱导后目的条带几乎没了？-1
2.蛋白大量破碎后有白色乳状沉淀


为何小样诱导有条带，大量诱导后目的条带几乎没了？-2
3.大量诱导后过柱图，上清液中目的蛋白量少
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-06-16 09:33:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xhw2033696

银虫 (初入文坛)
跑一下沉淀吗，可能大部分都是包涵体的

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2017-06-16 10:14:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我是一只老年

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xhw2033696 at 2017-06-16 10:14:15
跑一下沉淀吗，可能大部分都是包涵体的

沉淀如何跑？用什么溶解
赞一下 回复此楼
3楼2017-06-16 10:31:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xhw2033696

银虫 (初入文坛)
直接加上样缓冲液跑就可以呀

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2017-06-16 10:35:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我是一只老年

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xhw2033696 at 2017-06-16 10:35:40
直接加上样缓冲液跑就可以呀

取多少沉淀啊？不应该让他溶解悬浮吗
赞一下 回复此楼
5楼2017-06-16 17:21:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飞天鱼丸

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

取少量沉淀后加20倍重量的8M尿素溶解，再跑胶。
赞一下 回复此楼
6楼2017-06-20 09:16:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 我是一只老年 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研调剂 +4 呼呼？~+123456 2026-03-24 4/200 2026-03-24 23:16 by barlinike
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +3 钢铁大炮 2026-03-24 3/150 2026-03-24 22:03 by bingxueer79
[考研] 材料调剂 +6 匹克i 2026-03-23 6/300 2026-03-24 21:09 by greychen00
[考博] 申博26年 +4 八6八68 2026-03-19 4/200 2026-03-24 15:49 by 小Ben呵呵
[考研] 材料与化工328分调剂 +4 。，。，。，。i 2026-03-23 4/200 2026-03-24 11:03 by 544594351
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +9 材料学257求调剂 2026-03-23 10/500 2026-03-24 07:36 by wangy0907
[考研] 求调剂 +7 十三加油 2026-03-21 7/350 2026-03-23 23:48 by 热情沙漠
[考研] 材料/农业专业，07/08开头均可，过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪！？！
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 6/300 2026-03-23 21:45 by 子系博
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-20 3/150 2026-03-22 16:00 by ColorlessPI
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
[考研] 一志愿华中科技大学071000，求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 化学调剂 +5 yzysaa 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:12 by peike
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 材料学硕333求调剂 +3 北道巷 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:17 by 学员8dgXkO
[考研] 274求调剂 +10 S.H1 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:51 by JourneyLucky
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +22 rare12345 2026-03-18 22/1100 2026-03-20 20:39 by zhukairuo
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭