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蛋白纯化不挂柱的一些问题 已有3人参与
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| 我表达的融合蛋白带有his标签，跑蛋白胶看上清目的蛋白很多，但是做纯化一直挂不上柱，都在穿透峰溜走了。我推测是空间结构问题影响了挂住效果，试过8m尿素完全变形，纯化确实提高很多，但是蛋白变性就没有意义了。请教各位大神，有什么提高纯化效果的方法？？？ |
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2511956298
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-13 22:59:34
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-13 22:59:34
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可以试试用加入少量的β-巯基乙醇，打开二硫键，然后在做纯化试试。。。个人想法 （百度搜索之后，发现的内容，借用别人的发给你） 原核细胞表达的包涵体经经反复洗涤后，8mol．L－1尿素溶解（完全变性了），加入复性液（成分：50 mmol．L－1 Tris-HCl,5mmol．L－1 EDTA,1mmol．L－1 氧化型谷光甘肽，5mmol．L－1 还原型谷光甘肽）稀释复性，10℃复性48h。 复性液中加入一定比例的氧化型谷光甘肽和还原型谷光甘肽更有利于蛋白复性。 |
2楼2017-06-13 09:22:29
3楼2017-06-13 09:58:25
liguanying
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