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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白纯化不挂柱的一些问题
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苏索suso

新虫 (初入文坛)

[交流] 蛋白纯化不挂柱的一些问题 已有3人参与

我表达的融合蛋白带有his标签，跑蛋白胶看上清目的蛋白很多，但是做纯化一直挂不上柱，都在穿透峰溜走了。我推测是空间结构问题影响了挂住效果，试过8m尿素完全变形，纯化确实提高很多，但是蛋白变性就没有意义了。请教各位大神，有什么提高纯化效果的方法？？？
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1楼 2017-06-12 20:40:59
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2511956298

铜虫 (初入文坛)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-13 22:59:34
可以试试用加入少量的β-巯基乙醇，打开二硫键，然后在做纯化试试。。。个人想法

（百度搜索之后，发现的内容，借用别人的发给你）
原核细胞表达的包涵体经经反复洗涤后，8mol．L－1尿素溶解（完全变性了），加入复性液（成分：50　mmol．L－1 Tris-HCl,5mmol．L－1 EDTA,1mmol．L－1 氧化型谷光甘肽，5mmol．L－1 还原型谷光甘肽）稀释复性，10℃复性48h。
复性液中加入一定比例的氧化型谷光甘肽和还原型谷光甘肽更有利于蛋白复性。
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2楼2017-06-13 09:22:29
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苏索suso

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 2511956298 at 2017-06-13 09:22:29
可以试试用加入少量的β-巯基乙醇，打开二硫键，然后在做纯化试试。。。个人想法

（百度搜索之后，发现的内容，借用别人的发给你）
原核细胞表达的包涵体经经反复洗涤后，8mol．L－1尿素溶解（完全变性了），加 ...

感谢您的回复，我表达的并不是包涵体，加融合标签的本质就是不想产生包涵体，二硫键也不太想改变，怕影响活性。
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3楼2017-06-13 09:58:25
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liguanying

银虫 (初入文坛)
试试离子柱吧

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4楼2017-06-13 22:31:53
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槑烦恼

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 2511956298 at 2017-06-13 09:22:29
可以试试用加入少量的β-巯基乙醇，打开二硫键，然后在做纯化试试。。。个人想法

（百度搜索之后，发现的内容，借用别人的发给你）
原核细胞表达的包涵体经经反复洗涤后，8mol．L－1尿素溶解（完全变性了），加 ...

请问β巯基乙醇影响跑SDS胶吗？
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5楼2018-08-25 12:44:23
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