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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 拟南芥突变体过表达
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shiliyusly

新虫 (小有名气)

[求助] 拟南芥突变体过表达 已有3人参与

各位大牛好！
我目前在做一个基因过表达拟南芥突变体来验证基因功能。
遇到的问题是T2代都没有出现表型，其他物种这个同源基因在拟南芥表型很明显，发表的文章也挺多了。
我构建的重组载体应该没问题，因为转烟草过表达表型是明显的。
T1代抗性苗是用22mg/L hyg培养基筛选，筛选率不是很高；T2代进行了叶片DNA PCR鉴定。
有个疏忽的地方是，我没有对单棵拟南芥进行套袋隔离授粉，只是用绳子把单棵的花绑了下，糟糕的是不同拟南芥还靠的挺近，有时不同棵的花会会碰在一起。
所以想请问，是不是没有套袋这种防止异化授粉的措施，会影响性状分离，所以没出现想要的表型？
有人有类似的没有套袋，但也能得到表型的经历吗？
即将毕业，从头来过时间又来不及，好忧伤~~
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1楼 2017-06-05 15:38:03
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
做个定量表达看看，是不是表达量不够高。
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。
2楼2017-06-05 18:01:43
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sherlock0088

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shiliyusly: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2017-06-07 08:52:00
引用回帖:
5楼: Originally posted by shiliyusly at 2017-06-05 21:00:44
没有呢，拟南芥是闭花自花授粉吗？...

是自花，不是闭花，你这T1代的阳性苗，一棵就是一个转基因事件，插入位点不同的，不套袋的话，转基因事件之间杂交了，还怎么纯化啊

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7楼2017-06-05 21:14:13
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sherlock0088

金虫 (小有名气)
从T1代就没有套袋吗？

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4楼2017-06-05 20:45:30
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普通回帖

shiliyusly

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2017-06-05 18:01:43
做个定量表达看看，是不是表达量不够高。

谢谢你！但这个困惑一直没明白，就是是否必须要套袋防止异化授粉呢？有人说是拟南芥开花前就完成授粉了。
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3楼2017-06-05 18:55:59
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shiliyusly

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sherlock0088 at 2017-06-05 20:45:30
从T1代就没有套袋吗？

没有呢，拟南芥是闭花自花授粉吗？
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5楼2017-06-05 21:00:44
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wszhp

新虫 (小有名气)
金币

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6楼2017-06-05 21:13:14
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shiliyusly

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by sherlock0088 at 2017-06-05 21:14:13
是自花，不是闭花，你这T1代的阳性苗，一棵就是一个转基因事件，插入位点不同的，不套袋的话，转基因事件之间杂交了，还怎么纯化啊
...

谢谢！
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8楼2017-06-06 21:24:17
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匿名

用户注销 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-07-22 08:52:14
shiliyusly: 金币+5 2017-07-26 08:27:12
本帖仅楼主可见
赞一下
9楼2017-07-04 14:03:20
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didongwei

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-22 08:52:28
shiliyusly: 金币+6 2017-07-26 08:25:04
异花授粉可能性不大，拟南芥是自花授粉，花开前已经完成授粉。另外，如果没有表型，请分析基因表达量，有时插入位置不合适，是没有表型的～

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不是优秀，而是不可替代
10楼2017-07-22 00:00:38
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