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yu-yumili

新虫 (初入文坛)

[求助] 构建质粒后,通用引物PCR总是得到两条带?

本人是克隆的新手,载体构建好后,师姐建议用载体通用引物进行菌液PCR验证,防止大肠杆菌本身的基因组含有相关基因。我用T7/SP6这一对引物做的菌液PCR,载体长度141bp,目的片段大概500bp,但是,看到跑胶出来的结果,我有点懵,不知道为什么,有目的片段的点都P出了两个条带,而且跑胶位置也是高高低低的,不在同一水平线上,有几个就感觉比目的片段要高一些。求助各位大神,帮小弟我解决一下这些小问题,被困惑好久又想不出原因,跪谢大家了!

构建质粒后,通用引物PCR总是得到两条带?
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大飞哥88

新虫 (初入文坛)

引物特异性问题,特异性不是很强

发自小木虫IOS客户端
2楼2017-06-02 11:21:00
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一颗行走的树

新虫 (初入文坛)

我的也是这样,最下面这一条是引物特异性不好引起的,你送测序了吗?我想知道你的结果,因为我的有条带,但是测不出来

发自小木虫IOS客户端
3楼2017-06-02 11:27:08
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西班牙

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 一颗行走的树 at 2017-06-02 11:27:08
我的也是这样,最下面这一条是引物特异性不好引起的,你送测序了吗?我想知道你的结果,因为我的有条带,但是测不出来

你们的问题解决了吗

发自小木虫Android客户端
4楼2019-05-13 16:57:38
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