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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 构建质粒后，通用引物PCR总是得到两条带？
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yu-yumili

新虫 (初入文坛)

[求助] 构建质粒后，通用引物PCR总是得到两条带？

本人是克隆的新手，载体构建好后，师姐建议用载体通用引物进行菌液PCR验证，防止大肠杆菌本身的基因组含有相关基因。我用T7/SP6这一对引物做的菌液PCR，载体长度141bp，目的片段大概500bp，但是，看到跑胶出来的结果，我有点懵，不知道为什么，有目的片段的点都P出了两个条带，而且跑胶位置也是高高低低的，不在同一水平线上，有几个就感觉比目的片段要高一些。求助各位大神，帮小弟我解决一下这些小问题，被困惑好久又想不出原因，跪谢大家了！

构建质粒后，通用引物PCR总是得到两条带？
20170531-剪切.jpg
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1楼 2017-06-01 16:11:53
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大飞哥88

新虫 (初入文坛)
引物特异性问题，特异性不是很强

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2楼2017-06-02 11:21:00
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一颗行走的树

新虫 (初入文坛)
我的也是这样，最下面这一条是引物特异性不好引起的，你送测序了吗？我想知道你的结果，因为我的有条带，但是测不出来

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3楼2017-06-02 11:27:08
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西班牙

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 一颗行走的树 at 2017-06-02 11:27:08
我的也是这样，最下面这一条是引物特异性不好引起的，你送测序了吗？我想知道你的结果，因为我的有条带，但是测不出来

你们的问题解决了吗

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4楼2019-05-13 16:57:38
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