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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 想请教一下各位大神为什么毕赤酵母做菌落PCR会P不出来。
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小臭臭

新虫 (初入文坛)

[求助] 想请教一下各位大神为什么毕赤酵母做菌落PCR会P不出来。已有1人参与

我用的方法是，直接从平板上挑取单菌落加入到5微升H20中，微波炉加热5分钟，之后做PCR，用了几种不同的引物，结果就是都P不出来，实在想不到是什么原因？想请问一下各位都是怎么做的？能P出来吗？
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1楼2017-05-20 20:56:27
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ziyya

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
菌挑的太多，模板量过高？
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春华不若秋实
2楼2017-05-20 21:44:21
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aishida

禁虫 (职业作家)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-20 22:23:28
本帖内容被屏蔽
3楼2017-05-20 21:56:18
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123456789z

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-21 22:47:11
挑单菌落在50ul水，煮沸10min 后冰浴2min ，12000rpm离心1min,取1ul 上清作为模版进行PCR

发自小木虫IOS客户端
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4楼2017-05-21 07:56:22
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小臭臭

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by aishida at 2017-05-20 21:56:18
挑单菌落在离心管（不要加水），5分钟高温加热5分钟负二十度反复几次再pcr

可以吗？不加水的话，菌会不会烤干呀？
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5楼2017-05-21 18:24:16
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小臭臭

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 123456789z at 2017-05-21 07:56:22
挑单菌落在50ul水，煮沸10min 后冰浴2min ，12000rpm离心1min,取1ul 上清作为模版进行PCR

那PCR体系的跟普通PCR体系有什么不同吗？
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6楼2017-05-21 18:24:55
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小臭臭

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ziyya at 2017-05-20 21:44:21
菌挑的太多，模板量过高？

有挑的不多的，很少的也是P不出来。
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7楼2017-05-21 18:25:51
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chenmx1257

新虫 (初入文坛)
我们也是永远p不出来，用的takara premix。后来换了家公司就ok了，你可以试试。

发自小木虫Android客户端
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8楼2017-05-24 09:20:45
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小八BBF

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by chenmx1257 at 2017-05-24 09:20:45
我们也是永远p不出来，用的takara premix。后来换了家公司就ok了，你可以试试。

我用的takara的rTaq也是都P不出来，请问您后来换了什么酶才做出来的呢？
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9楼2017-07-31 15:53:46
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